一、产品简介：

在胆固醇酯酶(CHER)和胆固醇氧化酶(CHOD)存在的胆固醇测定系统中，加入特异的表面活性剂，选择性地使 LDL-C 溶解，以测定 LDL-胆固醇。其他脂蛋白（HDL、 VLDL、乳糜微粒）由于受到表面活性剂和糖化合物的阻碍而不反应，在反应液中以脂蛋白形式残存。基于这个原理，可以直接测定 LDL-胆固醇。

接着利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC），FC在胆固醇氧化酶作用下被氧化生成4-胆甾烯酮和H2O2；接着与4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物，其在546nm处有特征吸收峰，通过检测546nm处吸光值即可得出LDL-C含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、无水乙醇、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取约0.1g组织样本加入研钵中，加入1mL无水乙醇，进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌或细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取500万细菌或细胞加入1mL无水乙醇；超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~100：1的比例进行提取。

③ 血清（浆）等液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至546nm。

② 所有试剂解冻至室温（25℃），操作表：

3、正式实验：

① 若预实验测定A2测定值大于1，则需将样本用乙醇进行稀释；若预实验△A测定低于△A空白，可增加样本取样质量W，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、按样本质量计算：

LDL-C(μmol/g 质量)

=C×V×(△A测定-△A空白)÷(△A标准-△A空白)÷W×D

=3×(△A测定-△A空白)÷(△A标准-△A空白)÷W×D

2、按细胞数量计算：

LDL-C(μmol/10⁴cell)

=C×V×(△A测定-△A空白)÷(△A标准-△A空白)÷N×D

=3×(△A测定-△A空白)÷(△A标准-△A空白)÷N×D

3、按血清（浆）等液体体积计算：

LDL-C(μmol/L)

=C×(△A测定-△A空白)÷(△A标准-△A空白)×D

=3×(△A测定-△A空白)÷(△A标准-△A空白)×D

C：标准溶液浓度3mmol/L=3μmol/mL；       V：提取液体积，1mL；                           

D：稀释倍数，未稀释即为1；               N：细菌或细胞数量，以万计；              

W：样本取样质量，g。