CHO细胞DNA残留的来源和影响

生物制品是指应用生物技术生产的制剂，包括疫苗、血液制品、生物技术药物等，这些制品在疾病治疗、肿瘤与免疫、血液病等领域具有不可替代的治疗作用。哺乳动物细胞表达系统在重组单抗药物的研发和生产中有广泛的应用,中国仓鼠卵巢(Chineseovary,CHO)被广泛的应用于生物制品领域。CHO细胞有良好的蛋白表达能力，表达的重组蛋白具有与人源蛋白相似的翻译后修饰，如糖基化修饰，因此能够提高治疗效果。并且CHO胞外蛋白分泌能力和稳定性都表现优异，可提高生物制品的产量和质量。CHO被广泛应用于抗体类药物的生产，包括完整抗体、抗体片段等;也被广泛用于生产多种重组蛋白疫苗，如乙型肝炎疫苗等。

需要在生产过程中去除来自宿主细胞的杂质，尽可能排除宿主细胞残留物质如DNA对产品质量的影响。现实情况是即使经严格的纯化和质控，终产品仍可能残留宿主细胞DNA(residual host cell DNA,rC DNA)，存在致瘤性、免疫原性、感染性等安全隐患。世界卫生组织(WHO)、FDA、欧盟和各国的药物注册监管机构,要求生物制品终产品中宿主细胞DNA的残留量不超过一定的标准。生产工艺和方法不同，要求也有一定差异，生物制剂宿主细胞DNA残留量一般应<100 pg/剂，最高应<10ng/剂。在《中国药典》三部(2020版)中规定，以动物细胞生产的生物制剂DNA残留量应≤100pg/剂，而以细菌、真菌生产的生物制剂的DNA残留量应≤10ng/剂。

CHO细胞DNA残留检测

生物制品生产周期长、生产工艺复杂，其中宿主细胞残留DNA是一项重要的安全性指标。检测宿主细胞残留DNA的方法包括DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR(qPCR)法。定量PCR的适用性较其他检测方法更好。从qPCR原理来看Taqman探针法优于荧光染料的SYBR Green法。《中国药典(2020版)》也在通则3407外源性DNA残留量测定法中新增定量PCR法。定量qPCR法更灵敏、准确、省时，已得到广泛应用。

在此基础上翼和研发了针对CHO宿主细胞DNA残留的检测试剂盒（CHO 100），是一款操作简便、灵敏度高、结果直观、专属性强的宿主DNA残留量检测试剂盒，为CHO细胞DNA残留量的检测提供可靠方法。Biowing® CHO残留DNA检测试剂盒用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中CHO宿主细胞DNA。采用一套引物探针在FAM通道定量检测样品中CHO残留DNA，另外一套引物探针在HEX通道检测内参DNA。该试剂盒提供了阴性对照，NCS对照和标准品浓度梯度稀释的标准曲线，可以实现CHO宿主细胞DNA残留量的检测,整个检测流程大概3小时。