这是《小兵读研记》的

第24回

“这个结果不对劲啊……”大兵看着小兵刚发的液相色谱实验结果喃喃自语。

大兵看的是小兵新鲜热乎做出的液相色谱图，其实类似的样品之前分析过，不能说和现在看到的图不一致吧，应该可以说是完全不同……

“结果就是这样的。”小兵还觉得自己没什么问题。

“流动相？”

“是对的”

“色谱柱？”

“是新的”

大兵的话全都被噎回来了。但是大兵始终觉得这个结果还是不正常，如果真是这个结果，这个样品的性质变化也过于大了，不合理啊，肯定有哪里出了问题，虽然目前还不知道是哪里出了问题。

如果是你，这个时候停一下，你会怎么办呢？

大兵采取的方法是，祭出杀手锏——Positive control。

大兵让小兵用以前测试过的样品作为阳性对照，先验证图谱是否与以前测定的结果一致来确定检测过程是否有问题。

如果一致，那就是样品的问题，如果不一致，那就是检测过程的问题。

最后发现，确实是检测过程有问题，问题主要出在色谱柱上，尽管据说是个新的。更换以后阳性对照和样品的图谱都正常了。

如果压根没想到用control来验证问题，小兵可能就直接下结论：样品性质变化了，不能用了，那可真是跑偏了。

其实大兵希望小兵在第一时间就能发现结果的异常（小兵读研记| “我看见了，但我没多想”），并且能够自己找到这件事情的问题所在。

这个例子提醒了我们实验中Control的重要性。Control组不仅仅是在实验遇到问题的时候帮我们验证分析问题的工具，更是在实验中保证结果可信的基础，在实验中必不可少。但很可惜，这样的基础问题仍然在小兵们的工作中频繁出现。

Control的作用

实验中的影响因素众多，通过设置对照实验，既可排除无关变量的影响，又可增加实验结果的可信度和说服力。

按对照的内容和形式上的不同，常用的对照类型有空白对照、自身对照、相互对照、条件对照、配对对照、标准对照、阳性对照、阴性对照、安慰剂对照等9种类型。

不同的实验类型用到的对照不同，比如药物的研究中，安慰剂对照是常见的。这里举例在小兵的实验中常用的类型和出现过的对照的问题。

1.  空白对照

空白对照指不做任何实验的对照组或不给对照组以任何处理因素。这里要注意的是，不是指什么都没有，而是指不含需要考察的因素。

例如，在很多测定时，都需要有背景缓冲液的检测作为空白对照，以表明对实验组的检测结果不是其背景成分造成的。

缺少空白对照的情况尤其常见。

小兵在测定蛋白浓度时，没有考虑背景缓冲液中的EDTA及硫酸铵对检测的影响，没有对背景缓冲液进行测定，因此出现了实验组的检测结果远低于预期的情况。

有时，空白对照的选择会不合理

有位小兵在研究细菌分泌的絮凝剂时，对絮凝剂效果的评价采用了PBS缓冲液作为空白对照。但实际上真正的背景是培养基而不是PBS。在快到毕业的时候，某天师妹向小兵提出了这点，小兵一试，天呐！单纯培养基的效果和发酵培养后的效果几乎相同！这……搞不好是培养基的效果而不是发酵出的絮凝剂的效果……非常尴尬，这还多花几天发酵干啥，直接用培养基呗……

有时，空白设定不完整

小兵在的实验组受到很多影响因素的影响，可能存在ABCD等，但是在设计control组的时候，并没有单独将ABCD因素分别设计不同的control，只有一组control，因此结果依然说明不了究竟哪个因素可能存在影响。

2. 阳性对照与阴性对照

阳性对照是指给对照组施以已经被证明是一种有效的处理因素。阴性对照是为排除假阳性而设的对照，阴性对照和空白对照有时相同有时不同。

在很多实验中，为了表明实验结果的可信性，阳性对照和阴性对照都需要有，正常才可确保实验是正常的，而不是假阳性和假阴性。

在大兵遇到的例子中，就是运用了阳性对照。在ELISA实验中，阳性对照和阴性对照非常常见。

在小兵的一次实验中，实验组出现了疑似目标物的吸收峰。阳性对照也有这个吸收峰，因此小兵开始时认为这就是目标峰，阴性对照应该不会在这里有峰。但过了一个月，小兵发现这个峰的后续研究怎么都不对劲。这个时候才想起再试一下阴性对照（其实也是空白对照），结果同样出现了该吸收峰，由此表明这个吸收峰并不是目标信号。

如果一开始小兵就把两个对照都做齐，就不至于耽误一个月的时间了。

3. 自身对照

自身对照关键是要看清楚实验处理前后现象变化的差异，实验处理前的对象状况为对照组，实验处理后的对象变化则为实验组。

有时候自身对照的初始情况会被忽视。比如做实验的样品往往会在保存的过程中发生变化，但是当刚拿到料液的时候，很多小兵都不会立刻进行检测分析，等到在冰箱里放了好久以后，要用的时候才测一下。可是样品很多时候都是不稳定的，等到想起来的时候几个月已经过去了，早就不是当初的样子……

小兵在实验中发现，自己的原料样品这个月和上个月检测的结果差异很大。过了很久才意识到，4℃保存的时间是对原料性质有影响的，包括拿出来放到室温的时候的时间。可是多久以后稳定？变化速率？变化到底有多大？都无所而知，因为0点已经错过了太久~

除了以上举的例子，因为control没做好而导致的失败例子还是很多的，此处由于自身的局限性，无法将这个问题完善的讲完。

只希望通过本文，提醒小兵们，在实验的时候，问问自己，我的control做了吗？做的对吗？尽量减少实验中不必要的问题，耽误时间精力。

文已发表在公众号学到老的科研小兵，欢迎关注、投稿、转载。

这是一个关于大兵小兵的连载

大兵小兵是谁？

大兵是刚毕业不久，刚投身于科研工作的新人。

小兵是刚进实验室开始读研的学生。

学生时代VS职场生涯

学场老鸟VS职场新人

大兵小兵在工作生活中遇到了各种麻烦事、迷茫、囧事

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