支原体的生物学特点

支原体（Mycoplasma）支原体是一种原核细胞病原体，大小是介于细菌和病毒之间，其细胞结构和形体大小与病毒以及细菌等病原体有明显的差异，且能够在体外独立存活，是目前所知能独立生活的十分小原核细胞微生物，缺乏细胞壁是支原体的显著特征。1898年Nocard和Roux从患胸膜肺炎的牛体中分离出一种病株，后证实为支原体。1944年Eaton等人从非典型肺炎患者体内分离出一种新的病原微生物，这种微生物后证实为肺炎支原体。1960年代正式确立支原体属（Mycoplasma）。

支原体与细菌和病毒不同，由于其特别的生物学特性(如缺乏细胞壁、基因组小等)，在合成及代谢上可能具有与细菌不同的特点。

支原体与人类疾病的发生

随着支原体的研究的日益增多，支原体的生物学特征越来越被熟知。目前支原体有一百多种，其中肺炎支原体、发酵支原体、生殖支原体、解脲支原体和人型支原体与人类疾病的发生关系密切。

肺炎支原体是引起支原体肺炎的主要病原体。其中大家熟知的肺炎支原体与上呯吸道感染、支原体肺炎等呼吸系统疾病的发生密切相关。因为肺炎支原体不具有细胞壁，作用于细胞壁的传统抗菌药物对支原体肺炎患者的治疗效果相对较差。肺炎支原体与生殖支原体是对人明确有致病作用的支原体。肺炎支原体粘附在宿主呼吸道黏膜上皮上，引起机体急性呼吸道感染性疾病。生殖支原体粘附在宿主泌尿生殖道上皮上，感染宿主泌尿生殖系统，引起生殖系统疾病。

支原体与细胞凋亡

支原体作为人类感染性疾病的常见病原体，支原体感染与细胞凋亡有关。Sokolova等学者的研究发现支原体与淋巴细胞、上皮来源肿瘤细胞共同培养后，支原体借产生的过量核酸内切酶，导致宿主细胞DNA裂解，增殖停滞，导致培养的细胞出现凋亡。细胞感染支原体后对其他凋亡诱发的因素，如Fas、TNF-a的敏感性也提高，导致细胞逐步丧失生命力。支原体感染与细胞凋亡关系密切。

发酵支原体和猪鼻支原体与人类肿瘤的关系密切，可通过影响宿主正常和异常细胞的新陈代谢和增殖分化，导致肿瘤细胞凋亡。肺炎支原体与生殖支原体与细胞凋亡的关系研究也越来越多，研究已经表明，肺炎支原体与生殖支原体感染引起的相关宿主细胞凋亡促进了疾病的发生与发展。

支原体感染的危害

随着科研和生产的需要，各种细胞用于疫苗生产、细胞工程、基因工程日益增多，包括杂交瘤细胞，传代细胞等。然而，支原体的感染是个严重问题。在各种细胞培养物和疫苗中君可检测到感染支原体。细胞被支原体污染后，凭外观难以发现。支原体感染后不引起明显的细胞形态改变，也不会导培养液的变化，所以很难被发现。但是细胞培养一旦感染支原体，细胞却可产生一-系列生物学变化，包括生长特征、细胞膜组成、染色体异常、酶系改变和病毒产量变化等。因此，细胞污染支原体，给科研和生产带来了严重的失。

除此之外，一些细胞生物制品也极易感染支原体，如细胞培养后制备的市售成品疫苗也存在污染支原体问题，影响疫苗的安全性，并且可能会引起支原体的再次传播。WHO规定细胞生产的活疫苗中不能存在支原体污染。

支原体污染的检测方法

支原体的检测方法有很多，包括直接法(培养方法)和间接法(如DNA荧光染色法、ELISA、免疫荧光法检测、电镜检査等)。每种检测方法都有自己的优势，也存在一些不足。如耗时长;不能同时覆盖多种常见支原体污染，灵敏度低，检测特异性差等。当前大家比较认可的检测方法是，聚合酶链式反应(PCR)检测方法，特别是荧光定量qPCR的检测方法受到越来越多的关注和好评。技术问世以来，荧光定量qPCR灵敏度高、特异性强，高效快速，节省了大量的人力和物力。

翼和生物开发的支原体检测试剂盒可以检测120种支原体，涵盖了大部分的支原体种类。包含两款试剂盒类型，如快检支原体试剂盒BPM50和高灵敏检测试剂盒BPMPro50能够满足多种检测场景的应用。BPM50应用于快检场景，BPMPro50则应用于支原体的高灵敏检测场景。具有以下特点：

灵敏：配合高效DNA提取试剂盒，检测灵敏度达10

CFU/mL。

稳定：全程闭管操作，无交叉污染。

可靠：含内参基因，避免假阴性。

方便：操作简单，无需电泳步骤。

鉴于支原体在环境中存在，由于 PCR 反应非常灵敏，实验操作中应注意以下事项，以免发生DNA 污染：

建议分区操作。

A区：样本DNA提取，建议在超净工作台完成；

B区：配制mix和qPCR阴性加样，建议在超净工作台完成；

C区：按照先加待测样本，后加阳性对照的顺序加样；建议阳性在专门的超净工作台加样；

D区：qPCR扩增检测。

2.建议在 qPCR 反应板上阳性对照的排布应远离待测样本和阴性对照；使用不同的移液器添加阳性对照与待测样本、阴性对照，并使用带滤芯的枪头进行加样。