全称: Cell Counting Kit-8
中文名: 细胞计数试剂盒-8
常用别名: CCK-8试剂盒， CCK-8
纯度：99%
厂家：AbMole
CCK-8试剂盒的核心化学成分是 WST-8。
WST-8 的化学名是 2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它是一种水溶性的四唑盐。
高水溶性： 不同于传统的MTT，WST-8及其生成的甲臜产物都是高度水溶性的。这意味着在检测过程中无需像MTT法那样需要溶解甲臜结晶的步骤（如加入DMSO），大大简化了操作流程，并避免了因溶解不充分带来的误差。
稳定性： WST-8在溶液中性质稳定，便于保存和使用。
低毒性： 相较于其他一些四唑盐（如MTT），WST-8对细胞的毒性更小，因此可以在同一批细胞上进行连续多天的动力学监测，而不会导致细胞过早死亡。
二、 原理与机制CCK-8法的原理基于活细胞线粒体中的脱氢酶的活性。
底物加入： 将CCK-8溶液加入到培养有细胞的培养基中。
酶促反应： 活细胞线粒体内含有的琥珀酸脱氢酶等电子耦合剂，能够将细胞代谢过程中产生的电子传递给WST-8。
颜色变化： WST-8接收电子后被还原，生成一种水溶性的橙色甲臜染料（Formazan）。这个反应过程可以简要表示为：WST-8（无色/微黄色） + 电子 → 甲臜（橙色）
定量检测： 生成的橙色甲臜物的量与活细胞的数量成正比。细胞越多，活性越强，脱氢酶活性越高，产生的甲臜就越多，颜色也就越深。
吸光度读取： 使用酶标仪在 450 nm 波长下检测溶液的吸光度（OD值）。OD值越高，代表活细胞数量越多或细胞活性越强。
注： 该反应需要一种中间电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS） 来高效地传递电子。在商品化的CCK-8试剂中，已经预先混合了WST-8和1-Methoxy PMS，使得反应非常灵敏和高效。
三、 实验应用CCK-8试剂盒因其简便、快速、灵敏和安全的特性，已成为细胞增殖和毒性检测的“金标准”之一。其主要应用包括：
细胞增殖检测：用于评估生长因子、激素、药物等对细胞增殖的促进作用。
细胞毒性检测：这是CCK-8最核心的应用之一。用于评估药物、化学物质、纳米材料、环境污染物等对细胞的毒性作用。
药物敏感性筛选：在个体化医疗中，测试患者来源的肿瘤细胞对不同化疗药物的敏感性，以指导临床用药。
细胞活性/存活率测定：在细胞培养、细胞转染、病毒感染等实验后，检测细胞的存活状态
高通量筛选：由于CCK-8操作简便、易于自动化，非常适合用于96孔板或384孔板的大规模药物或基因筛选。
四、 标准实验步骤简介铺板： 将细胞悬液接种到96孔板中，设置空白组（只有培养基+CCK-8）、对照组（细胞+培养基）和实验组（细胞+含药物的培养基）。
培养： 在细胞培养箱中培养至细胞贴壁/适应（例如，24小时）。
加药处理： 向实验组加入不同浓度的待测药物。
孵育： 继续培养一段预定时间（如24, 48, 72小时）。
加入CCK-8： 每孔加入一定体积（通常是培养基体积的10%）的CCK-8溶液。
孵育显色： 将培养板放回培养箱，避光孵育1-4小时（时间需预实验优化）。
检测： 使用酶标仪，在450 nm波长下测定各孔的吸光度（OD值）。
五、 优势与局限性
优势：灵敏度高： 检测限低，即使细胞数量很少也能有效检测。
操作简便： “混合-孵育-检测”三步完成，无需额外洗涤或溶解步骤。
重现性好： 水溶性产物避免了结晶溶解不均带来的误差。
安全性高： 无需使用放射性物质或有毒的有机溶剂（如MTT法中的DMSO）。
非破坏性： 对细胞毒性小，可用于连续动态监测。
成本较高： 相较于传统的MTT法，CCK-8试剂的价格更昂贵。
受代谢活性影响： 检测的是脱氢酶活性，间接反映细胞数量。如果待测物质本身影响细胞的代谢状态（但不一定导致死亡），可能会产生干扰信号。
颜色干扰： 如果待测药物本身有颜色，或者会与CCK-8发生反应，可能会干扰最终OD值的读取。
六、 与其他方法的比较
vs. MTT法：
CCK-8优势： 水溶性，无需溶解步骤，更灵敏，毒性更小，操作更快捷。
MTT优势： 成本低廉。
vs. MTS法：
两者原理相似，都是水溶性四唑盐法。但CCK-8通常被认为更稳定、更灵敏.
vs. 台盼蓝染色法：
台盼蓝是直接计数死细胞，而CCK-8是间接检测活细胞。CCK-8更适合高通量检测，但台盼蓝能提供细胞形态学信息。
CCK-8试剂盒是一种基于WST-8的先进、高效、可靠的细胞增殖与毒性检测工具。其水溶性和一步法检测的特点使其在基础研究、药物开发和临床检测等领域得到了极其广泛的应用，极大地简化了实验流程并提高了数据的可靠性。
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