AbMole蛋白酶抑制剂Cocktail（不含EDTA，100X DMSO储液）是一种低毒，全面的蛋白保护试剂，最大限度地保护蛋白免受蛋白酶降解，提高蛋白得率。本品可用于蛋白免疫印迹 (WB)、免疫共沉淀 (Co-IP)、pull-down、免疫沉淀 (IP)、免疫组织化学 (IHC)、免疫荧光 (IF)、酶学研究等多种与蛋白相关的实验。
一、化学性质与组成该蛋白酶抑制剂Cocktail是一种多种抑制剂成分的混合物，通常以100倍浓缩液的形式提供，溶剂为二甲基亚砜（DMSO）。其关键特征是不含金属离子螯合剂EDTA。一款典型的此类Cocktail包含6种独立成分，每种成分针对特定类型的蛋白酶，并具有明确的化学特性：
AEBSF（104 mM）：针对丝氨酸蛋白酶。
Aprotinin（80 μM）：针对丝氨酸蛋白酶。
Bestatin（4 mM）：针对氨肽酶。
E-64（1.4 mM）：针对半胱氨酸蛋白酶（如组织蛋白酶）。
Leupeptin（2 mM）：针对丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶。
Pepstatin A（1.5 mM）：针对天冬氨酸蛋白酶（如胃蛋白酶、组织蛋白酶D）。
该混合物在-20°C条件下可稳定保存至少一年。使用前需回温至室温并短暂离心，然后按1:100的比例（v/v）稀释到蛋白质样品溶液（如细胞裂解液或组织提取液）中。
二、作用原理其作用原理是基于混合物中各组分特异性且可逆或不可逆地结合到不同类别蛋白酶的活性中心，从而抑制其水解活性。
丝氨酸蛋白酶抑制剂：AEBSF是一种不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂，在溶液中稳定性较好；抑肽酶（Aprotinin）则是可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂。
半胱氨酸蛋白酶抑制剂：E-64不可逆地抑制半胱氨酸蛋白酶；亮抑蛋白酶肽（Leupeptin）可逆地抑制某些半胱氨酸和丝氨酸蛋白酶。
天冬氨酸蛋白酶抑制剂：胃酶抑素A（Pepstatin A）可逆地抑制天冬氨酸蛋白酶。
氨肽酶抑制剂：乌苯美司（Bestatin）可逆地抑制氨肽酶B和亮氨酸氨基肽酶。
通过这些组分的协同作用，能够广泛覆盖多种蛋白酶，确保对蛋白质样品的全面保护。
三、实验应用这种抑制剂Cocktail具有广谱的蛋白酶抑制活性，适用于从动物、植物、细菌、酵母及真菌等多种来源的组织或细胞中提取蛋白质。由于其不含EDTA，特别适用于后续实验需要保留金属离子活性或涉及金属离子依赖的蛋白研究，例如：
固定化金属亲和层析（IMAC）：用于纯化多聚组氨酸标签的重组蛋白时，EDTA会螯合镍等金属离子，干扰纯化过程，而不含EDTA的Cocktail则无此影响。
蛋白质组学分析：如二维凝胶电泳（2-DE） 和质谱（MS）分析。某些抑制剂Cocktail经过特殊优化，不含会引起质谱峰漂移的组分（如AEBSF），因此与质谱检测兼容性更好。
其他常见分子生物学技术：包括蛋白质免疫印迹（Western Blot, WB）、免疫共沉淀（Co-IP）、Pull-down技术、免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC） 以及激酶活性测定（kinase assay） 等。
四、注意事项储存与使用：产品应在-20°C保存，并尽量避免反复冻融。DMSO在低温下融化较慢，建议在25°C水浴中融化。使用时应穿实验服并戴一次性手套操作。
抑制剂局限性：此Cocktail主要抑制丝氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸蛋白酶和氨肽酶。不含EDTA意味着其对金属蛋白酶的抑制能力较弱。如果您的样品中金属蛋白酶活性较高，且后续实验允许，可能需要考虑额外添加EDTA或其他金属蛋白酶抑制剂。此外，它不抑制磷酸酶，因此在进行磷酸化蛋白研究时，需要额外使用磷酸酶抑制剂。
溶液配制：含有Cocktail的裂解液最好现用现配，不宜配制后冻存待后续长期使用。对于某些蛋白酶活性特别高的样本，可能需要提高使用浓度（如2×）
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