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MCE 国际站：GSK484 hydrochloride

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-100514

CAS：1652591-81-5

纯度：99.72%

存储条件：4°C，在氮气下储存，远离潮湿 *在溶剂中：-80°C，1 年；-20°C，6 个月（在氮气下储存，远离潮湿）

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：GSK484 hydrochloride 是一种有效且可逆的肽酰基精氨酸脱亚氨酶 4 (PAD4) 抑制剂。GSK484 hydrochloride 高亲和力与 PAD4 结合，在不存在钙的情况下 IC50 为 50 nM。在 2 mM 钙的存在下，IC50 为 250 nM。

生物活性：GSK484 hydrochloride 是一种选择性、可逆的肽基精氨酸脱亚氨酶 4 (PAD4) 抑制剂。在不存在钙的情况下，GSK484 hydrochloride 表现出与 PAD4 的高亲和力结合，IC₅₀ 为 50 nM。在 2 mM 钙的存在下，观察到显着较低的效力 (250 nM)。 IC50 和目标：IC50：50 nM（PAD4，没有钙），250 nM（PAD4，有 2 mM 钙）^[1] 体外： GSK484 表现出与 PAD4 的低钙形式的高亲和力结合，在没有钙 (0 mM) 和钙 ( 2毫米），分别。 GSK484 还以浓度依赖性方式抑制苯甲酰精氨酸乙酯 (BAEE) 底物的 PAD4 瓜氨酸化（在 0.2 mM 钙下），如使用 NH₃ 释放测定^{[1]< /sup>。 体内实验：为了确定 PAD4 抑制是否可以抑制癌症相关的肾损伤，每天用 4 mg/kg 的 PAD4 抑制剂 GSK484 治疗 MMTV-PyMT 小鼠，持续一周.该剂量抑制了癌症小鼠外周血中经历 NETosis 的中性粒细胞数量增加。同时，与未经治疗的荷瘤小鼠相比，MMTV-PyMT 小鼠尿液中的总蛋白水平显着降低，进一步支持了 GSK484 治疗后肾脏功能状态的改善。在一周内每天以 4 mg/kg 的剂量施用 GSK484 可使荷瘤小鼠的肾功能障碍迹象恢复到与 DNase I 治疗相同的程度，并且没有任何可检测到的毒性迹象[2] .}

体外：GSK484 hydrochloride 表现出与 PAD4 的低钙形式的高亲和力结合，在没有钙 (0 mM) 和钙 (2 mM) 的情况下，IC50 分别为 50 nM 和 250 nM。GSK484 hydrochloride 还以浓度依赖性方式抑制苯甲酰精氨酸乙酯 (BAEE) 底物的 PAD4 瓜氨酸化 (在 0.2 mM 钙下)，如使用 NH3 释放测定[1]。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

体内：为了解决 PAD4 抑制是否可以抑制癌症相关肾损伤，MMTV-PyMT 小鼠每天用 4 mg/kg 的 PAD4 抑制剂 GSK484 hydrochloride 处理一周。该剂量抑制了癌症小鼠外周血中经历 NETosis 的中性粒细胞数量增加。同时，与未经处理的荷瘤小鼠相比，MMTV-PyMT 小鼠尿液中的总蛋白水平显著降低，进一步支持了 GSK484 hydrochloride 处理后肾脏功能状态的改善。在一周内每天以 4 mg/kg 的剂量施用 GSK484 hydrochloride 可使荷瘤小鼠的肾功能障碍迹象恢复到与 DNase I 处理相同的程度，并且没有任何可检测到的毒性迹象[2]。 MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

动物实验：小鼠[2] 本研究包括两种转基因小鼠模型，乳腺癌的MMTV-PyMT小鼠模型（FVB/n背景）和胰腺神经内分泌癌的RIP1-Tag2小鼠模型（C57BL/6背景）。小鼠每天腹膜内注射PAD4抑制剂GSK484（4mg/kg）。GSK484以25mg/mL的浓度溶于99.9％乙醇中以产生原液，然后在注射200μL/只小鼠之前在0.9％NaCl中进一步以1:50稀释[2]。MCE尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

细胞实验：稳定表达 N 端 FLAG 标记的 PAD1、PAD2、PAD3 或 PAD4 的 HEK293 细胞通过逆转录病毒转导进行改造。细胞在直径为 15 cm 的培养皿中生长，在补充有 10% 胎牛血清的 DMEM 中达到亚融合，通过离心收获并在 PBS/2 mM EGTA 中清洗一次。细胞在 50 mM Tris-Cl、pH 7.4、1.5 mM MgCl2、5% 甘油、150 mM NaCl、25 mM NaF、1 mM Na3VO4、0.4% NP40、1 mM DTT 和蛋白酶抑制剂中裂解。将裂解物在 4°C 下与 DMSO（2%）、100 µM GSK199、GSK484、GSK106 或 200 µM Cl-amidine 预孵育 20 分钟。在 2 mM 钙存在下，在 37°C 下进行瓜氨酸化反应 30 分钟。将提取物加载到凝胶上，通过 SDS-PAGE 分离蛋白质并转移到 PVDF 膜上。然后对瓜氨酸化蛋白质进行化学修饰，并使用抗修饰瓜氨酸抗体进行检测。使用抗 FLAG 抗体检测 FLAG-PAD 构建体[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

激酶实验：在含有 10 nM GSK215 的测定缓冲液（100 mM HEPES，pH 8，50 mM NaCl，5% 甘油，1 mM CHAPS，1 mM DTT）中，以不同浓度的钙（0、0.2、2 和 10 mM）对 PAD4 进行连续稀释。孵育 50 分钟后，使用单点饱和曲线确定每种钙浓度的表观 Kds。对于 IC50 测定，将测试化合物（例如 GSK484）在 DMSO（1% 最终测定浓度）中连续稀释，并在 PAD4（在每种钙条件下计算的 Kd）和 10 nM GSK215 存在下在相同范围的钙浓度下进行测试，使用相同的测定缓冲液和体积。反应孵育 50 分钟，然后使用四参数逻辑方程 [1] 计算 IC50 值。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

IC50 & Target：50 nM (PAD4, in the absence of Calcium), 250 nM (PAD4, in the presence of 2 mM Calcium)[1]

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参考文献：[1]. Lewis HD,  et al. Inhibition of PAD4 activity is sufficient to disrupt mouse and human NET formation. Nat Chem Biol. 2015 Mar;11(3):189-91.[2]. Cedervall J,  et al. Pharmacological targeting of peptidylarginine deiminase 4 prevents cancer-associated kidney injury in mice. Oncoimmunology. 2017 Apr 20;6(8):e1320009.

品牌介绍:&bull;   MCE (MedChemExpress) 拥有200 多种全球独家化合物库，我们致力于为全球科研客户提供前沿最全的高品质小分子活性化合物；&bull;   50,000 多种高选择性抑制剂、激动剂涉及各热门信号通路及疾病领域；&bull;   产品种类涵盖各种重组蛋白，多肽，常用试剂盒 ，更有 PROTAC、ADC 等特色产品，广泛应用于新药研发、生命科学等科研项目；&bull;   提供虚拟筛选，离子通道筛选，代谢组学分析检测分析，药物筛选等专业技术服务；&bull;   设有专业的实验中心和严格的质控、验证体系；&bull;   提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告，确保产品的高纯度、高品质；&bull;   产品的生物活性多经各国客户实验验证；&bull;   Nature, Cell, Science 等多种顶级期刊及制药专利收录了MCE客户的科研成果；&bull;   专业团队跟踪最新的制药及生命科学研究进展，为您提供全球最新的活性化合物；&bull;   与世界各大制药公司及知名科研机构建立了长期的合作。