||
诺敏科达新推出一款货号为NMK0006的生化试剂盒,引入质控品(Quality Control, QC)确保实验结果准确性和可靠性,适合实验室高效开展CAT活性分析。无论是科研探索还是临床前研究,它都能提供可靠的数据支持!
一、产品简介:
过氧化氢(H2O2)是一种活性氧物质,它是正常有氧代谢过程中产生的有毒产物,也是涉及氧化酶和超氧化物歧化酶反应的致病性活性氧物质的产物。过氧化氢对真核细胞有毒害作用,在高剂量下可引发 DNA、脂质和蛋白质的氧化,从而导致突变和细胞死亡。
过氧化氢酶(Catalase,CAT)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,其主要功能是催化生物体内的 H2O2 分解,使机体免受自由基损伤。在动物体内,过氧化氢酶具有抗氧化损伤、抑菌抗炎、增强免疫保护、抗癌等多种生物学功能,在养殖业中往往被用作饲料添加剂;在植物体内,过氧化氢酶是最重要的抗氧化酶,作为过氧化氢的清除者,也参与维持植物稳定、光呼吸、植物免疫、非生物胁迫响应、植物激素信号传导、植物体内活性氮代谢等多种生理生化过程,在植物生长和胁迫响应中起着十分重要的作用。
二、检测原理:
本试剂盒利用过氧化氢酶(CAT)催化 H2O2 进行分解,剩余 H2O2 与过氧化氢探针 10-乙酰基-3,7 二羟基吩嗪(ADHP)在存在过氧化物酶(POD)的反应体系中,ADHP 试剂与 H2O2 以 1:1 化学定量反应,生成强红色荧光的试卤灵,通过酶标仪读取 570nm 处的吸光度值,以消耗的 H2O2 为标品绘制标准曲线,可计算过氧化氢酶(CAT)的活性。
三、检测步骤:
3.1 标准溶液的配制:
将标准品用蒸馏水进行稀释,得到不同浓度的标准品。
3.2 样本提取:
准确称取适量样本于离心管中,按照说明书样本制备步骤提取样本,得到样本上清备用。
3.3 测定步骤:
酶标仪预热30min以上,调节波长至570nm,按照加样表顺序加样,在570nm处读取吸光值。
四、样本测值:
以标准品浓度(μmol/mL)为横坐标,对应的变化吸光值为y轴,绘制标准曲线。将样品吸光值代入标准曲线,计算样品中CAT含量(μmol/mL)。标准曲线如下图所示:
图1:CAT的标准曲线
图2:样本测值情况
五、小结:
5.1 高灵敏度 & 快速检测
比色法直观高效:在CAT的催化下,体系中的探针与底物过氧化氢进行结合,在无色的体系中生成强红色荧光物质试卤灵,该物质在 570nm 处有强吸收峰,肉眼可观察显色变化,配合酶标仪定量。
高通量检测:从样本处理到结果计算,标准化流程设计大幅缩短实验时间,适合高通量检测。
5.2 多维度兼容性
样本类型广泛:支持血清、血浆、动值物组织等多种样本,前处理简单。
多指标灵活计算:提供3种酶活单位计算方式(U/mgprot、U/mL、U/g),适配不同研究需求(如蛋白浓度校正、组织含量分析)。
多规格可选:96T/48T规格可选,满足不同检测规模需求,减少试剂浪费。
5.3 数据可靠性保障
质控体系完善:随盒附带质控品,支持实验过程质量控制。
抗干扰设计:试剂经优化可减少内源性干扰,确保低背景信号和高信噪比。
标准曲线精准校准:内置6个浓度梯度标准品,线性范围广,实验结果可溯源(见图1标准曲线)。
六、二代产品方法学比较
Norminkoda的过氧化氢酶活性检测有2代产品:
一代产品NMW0102,是紫外吸收法,原理是H2O2在240nm处具有特征吸收峰,过氧化氢酶能够分解H2O2,使反应溶液在240nm处吸光值随反应时间而下降,根据吸光值变化速率即可表征过氧化氢酶的活性。
该方法的优点是快速,试剂成本低,但在240nm处检测H2O2的剩余量,但由于CAT分解H2O2会产生氧气,测定时会有气泡干扰,并且240nm靠近蛋白吸收区,可能有干扰。
二代产品NMK0006,原理是CAT催化 H2O2 进行分解,剩余 H2O2 与过氧化氢探针在存在过氧化物酶(POD)的反应体系中,探针与H2O2以 1:1 化学定量反应,生成强红色荧光的试卤灵,通过酶标仪读取 570nm 处的吸光度值,以消耗 H2O2 为标品绘制标准曲线,可计算过氧化氢酶的活性。
该方法的优点是引入探针,与H2O2结合后,生成可见区显色的物质,提高了灵敏度,避免了紫外区蛋白的干扰,但反应复杂,需要多步反应后显色,试剂成本高。
Norminkoda提供过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒比色法试剂盒,酶标仪仪器使用的96T(NMK0006-96T)和48T(NMK0006-48T),欢迎关注咨询!
Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )
GMT+8, 2025-9-17 17:25
Powered by ScienceNet.cn
Copyright © 2007- 中国科学报社