Programming Cells by Multicopy Chromosomal Integration Using CRISPR-Associated Transposases

使用CRISPR相关转座酶通过多拷贝染色体整合对细胞进行编辑

来源：CRISPR JOURNAL

IF：6.352

摘要：定向进化和靶向基因组编辑已被用于创建合成生物学。然而，这些方法仅限于高通量筛选方法或单个基因的连续操作。在这项研究中，我们使用CRISPR相关转座酶（MUCICAT）实现多拷贝染色体整合，同时靶向大肠杆菌染色体上的多达11个位点，以进行多重基因中断和/或插入，从而产生组合基因组多样性。通过取代异丙基-β-D-硫代乳糖苷（IPTG）依赖性启动子来解耦基因编辑和产物合成，改进了MUCICAT系统。我们应用MUCICAT设计和优化大肠杆菌中的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）生物合成途径，在短短8天内即可超额产生具有工业重要性的GlcNAc。