一、产品简介：

SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O₂^-)，O₂^-可与WST-8反应产生水溶性染料甲臜，后者在450nm处有吸收；SOD可清除O₂^-，从而抑制了甲臜的形成；反应液黄色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取0.1g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；建议500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清置于冰上待测。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm。

② 测定前将试剂一、三和四37℃水浴5min以上，试剂二使用时在冰上放置。

③ 操作表：

3、正式实验：

① 预实验测定时尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内，越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本或者提高加样表中的样本量，但需相应减少测定管和对照管中试剂一的体积；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、抑制百分率的计算：抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定)÷ΔA空白×100%

2、活性单位定义：在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位(U)。

3、按样本质量计算：

SOD活性(U/g质量)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V2]÷(W×V1÷V)×D

=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W×D

4、按样本蛋白浓度计算：

SOD活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V2]÷(V1×Cpr)×D

=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr×D

5、按细菌或细胞数量计算：

SOD活性(U/10⁴ cell)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V2]÷(N×V1÷V)×D

=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷N×D

V：加入提取液体积，1mL；               V1：反应中样本体积，0.02mL；

V2：反应体系总体积，0.2mL；             D：稀释倍数，未稀释即为1；

W：样品质量，g；                        N：细胞数量，以万计；

Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。