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采用双色荧光探针检测PDX人源细胞比例

已有 121 次阅读 2025-11-10 22:46 |个人分类:PDX模型质控|系统分类:科研笔记

PDX模型(人源肿瘤异种移植型,Patient-DerivedtumorXenograft,PDX)是将从癌症患者身上手术切除的小块肿瘤植入高度免疫缺陷的小鼠体内,肿瘤生长,随后移植到次级受体小鼠体内。目前PDX免疫缺陷小鼠品系主要包括四种:Nude mice、SCID、NOD-SCID、NSG小鼠小鼠,这些小鼠均是免疫缺陷小鼠,缺乏功能性T细胞和/或B细胞的重度联合免疫缺陷小鼠。由于是直接来源于患者的肿瘤组织,这种模型保存了患者自身的特殊表征,保留了肿瘤的微环境,能够再现细胞系系统未能捕获的肿瘤异质性,是癌症机制研究和药物测试的有用工具。肿瘤开始生长,之后可以取一部分肿瘤组织进行基因测序分析,包括外显子测序、RNA测序、转录组测序等,有可能筛选和识别出对患者肿瘤有效的药物。 但随着传代次数增加,肿瘤组织保真度下降。翼和生物PDX模型质控检测采用双色荧光探针,双标准曲线绝对定量qPCR方法检测PDX模型中人/小鼠细胞的比例,从而快速、高效判断PDX模型中小鼠细胞的浸润状态。 人与小鼠的双标准曲线中,随着PCR反应体系中模板总浓度的变化,lg样本量与Ct值均成线性关系,线性范围宽。 每批次检测,均绘制标准曲线,三个阳性标准品分别3次技术重复,绘制散点图并添加线性拟合趋势线,获得回归方程,用于小鼠细胞浸润比例的计算。试剂盒中包含小鼠DNA和人源DNA混合阳性标准品,图中阳性标准品分别对应小鼠DNA含量为20%、50%和80%。 检测方法有灵敏度高、特异性强、操作方便、稳定可靠的优势,适合PDX人源比例检测的多种应用场景。

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