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翼和生物线粒体拷贝数检测技术

已有 51 次阅读 2025-7-8 09:26 |系统分类:科研笔记

线粒体作为细胞的“能量工厂”,其DNA拷贝数的异常与衰老、糖尿病、心血管疾病、神经系统疾病及肿瘤等多种疾病密切相关。然而,线粒体在细胞内和游离状态下的动态变化一直是研究难点。上海翼和推出的线粒体拷贝数检测技术,凭借先进的双色荧光TaqMan探针技术,为科研与临床提供了高效、精准的解决方案。

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技术亮点:双色荧光TaqMan探针法

采用双色荧光TaqMan探针法定量PCR,通过FAM荧光通道计算线粒体拷贝数,HEX荧光通道同步检测细胞数目或质控游离基因组DNA抽提质量。双重荧光设计不仅显著提升检测效率,还能减小孔间差异,确保结果稳定可靠。与传统的SYBR Green法相比,TaqMan探针法特异性更强,准确度更高,尤其适用于低丰度样本的检测。

核心优势

一盒双测:同一试剂盒可检测细胞内和游离线粒体拷贝数,满足多样本类型需求。

高性价比:多重反应设计减少试剂用量,降低实验成本。

精准分析:标准曲线双重校准,确保拷贝数定量绝对准确。

检测流程

1. 样本采集与处理使用EDTA抗凝管采集血液样本,避免使用肝素抗凝。样本采集后需在30分钟内分离血清,并在-20保存以备后续检测。对于细胞样本,需确保DNA纯度(A260/A280 ≈ 1.8)并标化浓度至10 ng/µL。

2. 标准品与校正品的准备标准品以两倍梯度稀释,形成不同浓度梯度的标准曲线。校正品用于校正检测结果,确保检测的准确性。

3. qPCR反应体系与条件根据样本数量准备qPCR反应体系,包括检测Mix、引物和探针等。反应条件通常包括预变性、变性、退火和延伸步骤,荧光信号在延伸阶段收集。

4. 数据分析通过标准曲线方程计算样本中mtDNA拷贝数,并结合校正系数进行绝对定量。检测结果以每细胞或每毫升样本中的mtDNA拷贝数表示。

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