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小技术大进步 精选

已有 7338 次阅读 2013-5-24 02:49 |系统分类:观点评述| 技术

我们实验室以玉米为模式生物,进行基因的克隆和功能分析,实验室从建立到前年,一直以图位克隆技术进行基因的克隆。该技术随着实验室成长一直在发展,但始终未到达最为成熟状态,当我们这届学生到来后,快速的推动了其发展,使之成为实验室最成熟的技术之一。当然这里面也有其他技术和仪器的进步,促进了该技术的进步。我们的贡献主要是对历届师兄师姐习以为常的实验方法和习惯做了小小的改动,然而这些小小的改动却在整体上提高了实验效率,使之三年才定位一个基因到现在最快半年就可以精确定位一个基因。

图位克隆应用过程中DNA的提取不能不说是一个限速步骤,最开始以CTAB法提取玉米幼苗DNA,一个人即便一天工作16个小时,累死累活的也就提取80份左右样品。后来有了组织研磨器,效率大大提高,一个人稍微努力点就可以处理300份样品,但这仍不能满足对DNA高通量提取的要求。后来有个同学在以碱裂解法提取质粒时,突发奇想,该方法是否可以用来提取籽粒DNA,网上一查,果真有这种方法的应用,称之为碱煮法,用该法一个人一天很轻松的就可以处理1000份样品。想想看,如果克隆一个基因需要2万个籽粒,以CTAB法和煎煮法提取DNA,时间的花费上比起来起止天壤之别。

图位克隆应用少不了每天要跟聚丙烯酰胺胶打交道,之前实验室配胶都是将各个组分配好之后放在试验台上,等到配胶时用移液枪按照不同浓度要求,一枪一枪的将各种组分加在一起,然后灌胶。另外一个同学对这种灌胶法做了些改进,除APSTEMED配胶前加入外,其余组分(双蒸水、TBE、聚丙烯酰胺)根据常用浓度按比例混在一个试剂瓶中,我们称之为预混液,其实就是市面上卖的预制胶。当配胶时只要临时加入APSTEMED就可以快速的完成聚丙烯酰胺胶的配制。时间上的节省不可同日而语。看到这里你有没有想过蛋白胶是否也可以自己配制个预混液?其实完全可以的。

其他方面也做了很多改动,使得图位克隆技术在实验室日益成熟。这些改动变化都是在熟知原理的情况下进行的,对于初学者如果不明白原理,最好不要随意变化,有可能导致你实验根本做不出来。但技术都是在进步的,当熟悉了原理后,可以尝试着做出一些改变,往往会收到一些意想不到的效果,怕的是熟悉后往往又习以为常,不会想着去改变。

今年是PCR技术发明三十周年,该技术的发明极大的促进了分子生物学领域的进步。PCR技术的发明者穆利斯于1993年获得诺贝尔奖,但此人在学术上并没有什么突出的造诣,他曾以调侃的语气说过一句话:“如果你的研究能力一般,那么,改革本研究领域中大家习以为常的最基本的技术,你就有可能获得诺贝尔奖。”

     

 



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