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细胞的鬼火-解决篇

已有 4304 次阅读 2015-5-24 12:57 |个人分类:活色生香de生物科学|系统分类:科研笔记| 自发荧光, HEK


这个月初我在做电生理记录HEK细胞的时候,我在想为什么有些死细胞的荧光那么亮。一开始我误以为是死细胞的自发荧光,我还觉得这是个非常有趣的现象,幸好有王皓,张磊,吴距,周小明等朋友陪我一起思考,尤其要感谢zuobuli。在zuobuli的坚持下,我按照他的建议作了对照试验,如下图。

我一共做了三个条件:

(1)     HEK不转染任何质粒

(2)    HEK转染GFP(green fluorescent protein绿色荧光蛋白)

(3)    HEK转染ChR2-GFP融合蛋白(channelrhodopsin-GFP fusionprotein

这里我要说明,zuobuli还建议我做HEK添加转染试剂但不加质粒的对照,因为我观察了(1)之后,发现没有转染的细胞完全没有荧光,我就没有做这个对照。

实验结果如图所示:A、B图为条件(3)HEK转染ChR2-GFP融合蛋白(channelrhodopsin-GFP fusionprotein)。C、D、E和F为条件(2)HEK转染GFP(green fluorescent protein绿色荧光蛋白)。从图中看出,两个条件下,都有不发荧光的死细胞(图中白色箭头所示T)。因此,我推翻了我之前的假设,并确认在我的实验条件下死细胞没有自发荧光。而条件(3)中,如图A,B所示的很多的发绿色荧光的死细胞,是表达了ChR2-GFP融合蛋白的。之所以死亡,一个原因是这个培养皿是在电生理记录实验后拍的照片,已经在培养箱外放了4小时,细胞外环境已经不好了。另外,这个融合蛋白我们进行了一些点突变,因此可能表达出来后,蛋白质运输(proteintranspotation)不是很顺利,因此积压在核周高尔基体内,对细胞也有一定毒性。

现在又有了新问题,为什么这些死细胞这么亮?我猜是蛋白质表达量过高,“货物积压”所致。细胞虽然死了,但是这荧光,还真是符合我“鬼火”的比喻呢。



陆绮

2015年5月24




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