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硬件补偿和软件补偿的选择

已有 8761 次阅读 2010-1-4 06:54 |个人分类:流式知识|系统分类:论文交流| 补偿

每个做流式细胞研究的人都有这样的经历,非常紧张的在流式仪上调节各个通道的荧光补偿值, 要注意对照细胞管液体不要跑完,还要查看各个荧光参数轴之间的细胞群分布情况,确定自己做了正确的调整。有时候,收集完数据后发现过渡补偿了, 对着自己的数据手足无措, 不得不从新跑样品。这是我当年做流式的一个梦魇!

流式领域里的很多人习惯了在流式仪上补偿他的数据,既所谓的硬件补偿方法。 这在早期的流式分析可能是唯一的选择。随着流式技术的进展
从当初的模拟仪器(FACS calibur 是代表之一)到现在的数字仪器(FACS Aria既其它很多)。 分析领域也有了长足的进步,很多人从利用仪器自带的采集软件分析数据到利用专业的离线分析软件,象FlowJo来快速生成专业的分析结果。 那么现在其实是可以将你的繁琐的补偿过程交给软件来做。有关这2者之间的对照请参看荧光补偿基础知识

那么很多人有这样那样的疑问
1。 如果我用的早期的流式仪,象FACS Calibur 之类的模拟仪器,那我还可以用软件补偿吗?
答案: 可以的。但是, 注意请不要用仪器补偿,或者在仪器上只是稍做补偿,既补偿不足。这样你还可以将你的数据拿到FlowJo里面做进一步的补偿。何为
补偿不足?请参看我的另外一篇文章如何确定流式分析中荧光补偿是正确的呢?

2。 如果我用的是数字仪器象FACS Aria, 那么怎么利用软件补偿呢?
FACS Aria, 在数据采集过程中会自动根据你的对照产生一个补偿矩阵。当你将数据转移到FlowJo里的时候,这个矩阵会以Aquisition comp 的形式出现在FlowJo中。所有的数据也会以补偿过的形式。你可以利用这个矩阵做分析,或者在FlowJo中产生新的矩阵。
用数字仪器需要注意的是,在数据导出的时候,以FCS3.0的形式,而非FCS2.0.
3.0的数据中,补偿矩阵是可逆的。 而
矩阵是写入2.0数据的,无法去除。



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