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MCE 国际站：D-Luciferin sodium

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-12591

CAS：103404-75-7

中文名称：D-萤光素钠盐

Synonyms：D-萤光素钠盐; D-(--Luciferin sodium; Firefly luciferin sodium; Beetle Luciferin sodium

纯度：99.92%

存储条件：4°C，密封保存，避光防潮 *溶剂中：-80°C，6个月；-20°C，1个月（密封保存，避光防潮）

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：D-Luciferin 是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，对萤火虫产生典型的黄绿光进行催化。该反应产生的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值，当底物荧光素过量时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子筛选的常用报告基因。化学发光技术实际上是无背景的，使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。在标准荧光计数仪中可以可靠地测量到 0.02 pg 的荧光素酶。除了用于基因表达的外，荧光素酶还用于 ATP 的检测。MCE提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004) 、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B) 。

生物活性：D-荧光素 (D-(-)-Luciferin) sodium 是荧光素酶的底物，可催化生物发光昆虫产生光^[1]。 体外 D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化萤火虫典型黄绿光的产生。本综述涵盖了合成D-萤光素及其衍生物或类似物，它们是来自美国萤火虫 Photinus pyralis 的萤光素酶的底物或抑制剂，这种酶更常用于体外和光学成像技术^{[1]< /sup>. D-萤光素在 PC3M-Luc 细胞裂解物中显示出测量的 K_m 降低，K_m 为 34 μM[ 2]。 体内：生物发光成像 (BLI) 使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因，D-荧光素作为底物，是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与 D-荧光素注射后的时间作图，以生成时间-强度曲线。除了峰值信号外，D-荧光素注射后固定时间点（5、10、15 和 20 分钟）的信号被确定为峰值信号的替代信号。给定时间-强度曲线中的信号针对曲线中的峰值信号进行归一化，以表示 D-荧光素注射后的时间变化模式[3]。注入 10 μL每克体重的 D-萤光素（腹膜内或静脉内）储备液：标准 150 mg/kg 注射的 20 g 小鼠通常约 200 μL。 解冻 D-萤光素（钾盐或钠盐）室温并溶解在 dPBS（不含钙或镁）中，最终浓度为 15 mg/mL。通过 5-10 mL 的无菌 H₂O 预湿 0.22 μm 过滤器并丢弃水。通过准备好的 0.22 μm 注射器过滤器对 D-荧光素溶液进行消毒。}

体外：1. 注意事项 a) D-萤光素盐易溶于水性缓冲液 (pH 6.1-6.5)，溶解度最高可达 100 mM。储备液可用不含 ATP 的水配制，并在 -20°C 下避光保存。游离酸必须用适当的碱中和才能溶解。在较高的 pH 值下，荧光素会在碱催化下形成脱氢荧光素，并外消旋化为 L-异构体。 b) D-荧光素可用于任何现有的报告分析或 ATP 分析系统。 c) 如果测试 ATP，请戴上手套并使用不含 ATP 的容器，以尽量减少所有可能的 ATP 污染源。仅使用无菌的无 ATP 水和试剂。使用高压灭菌水制备所有试剂。 2. 实验方案 本方案仅提供一个指导，应根据您的具体需要进行修改。 以下方案是钾和钾的示例钠盐制备。它适用于大多数细胞类型和体内动物使用。 2.1 体外生物发光图像分析的示例方案 a) 在无菌水中制备 100 mM (100-200X) 荧光素原液。拌匀。立即使用，或一次性分装，-20°C保存，避免冻融循环，避免光照。 b) 制备0.5-1 mM D-Luciferin工作液于pre-加热的组织培养基。 c) 从培养的细胞中吸出培养基。 d) 向细胞中加入荧光素工作溶液，并在成像前将细胞在 37°C 下孵育 5-10 分钟。 2.2 体内生物发光图像分析的示例方案 a) 在 DPBS 中制备 15 mg/mL 荧光素原液，不含 Mg2+ 和 Ca2+。混合均匀。 b) 过滤器通过 0.2 μM 过滤器对溶液进行除菌。立即使用，或一次性分装，并储存在 -20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。 c) 成像前 10-15 分钟腹膜内 (ip) 注射荧光素在动物体重的 150 mg/kg (或 10 μL/g 荧光素原液) 下。注意：应对每个动物模型进行荧光素动力学研究以确定峰值信号时间。 2.3 荧光素报告基因检测的示例方案 a) 在无菌水中制备 100 mM 荧光素原液。立即使用，或一次性分装，-20°C 保存，避免冻融循环，避免暴露在光线下。 b) 制备 1 mM 的 D-Luciferin 工作溶液和 3 mM ATP，1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 在 25 mM Tricine 缓冲液 pH 7.8 中。 c) 将 5-10 μL 细胞裂解物移至微孔板中。使用裂解试剂或不含裂解物的缓冲液作为空白。 d) 根据制造商的说明用荧光素工作溶液灌注发光计。 e) 立即注入 200 μL 荧光素工作溶液，积分时间为 10 s. MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

体内：使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因和 D-荧光素作为底物的生物发光成像 (BLI) 是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与 D-荧光素注射后的时间作图，以生成时间-强度曲线。除了峰值信号外，D-荧光素注射后固定时间点 (5、10、15 和 20 分钟) 的信号被确定为峰值信号的替代信号。给定时间-强度曲线中的信号针对曲线中的峰值信号进行归一化，以表示 D-荧光素注射后的时间变化模式[3]。注入 10 μL每克体重的 D-萤光素 (腹膜内或静脉内) 储备液：标准 150 mg/kg 注射的 20 g 小鼠通常约 200 μL。 解冻 D-萤光素 (钾盐或钠盐) 室温并溶解在 dPBS (不含钙或镁) 中，最终浓度为 15 mg/mL。通过 5-10 mL 的无菌 H2O 润湿0.22 μM 过滤器并丢弃水。通过准备好的 0.22 μM 注射器过滤器对 D-荧光素溶液进行消毒。 MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

动物实验：小鼠[3]体内 BLI 是在接种 HCT116-Luc 细胞后 3、5、7、10、12、14、19、21、24 和 28 天，使用冷却电荷耦合器件摄像系统 (IVIS 成像系统 100) 进行的。将 75 mg/kg D-荧光素注入 100 μL 磷酸盐缓冲盐水中，注射至小鼠肩胛骨附近皮下，然后放入成像系统的不透光室中。注射后 5 分钟开始，以每分钟一张的速度连续获取曝光时间为 1 秒的背部发光图像，直至注射 D-荧光素后 20 分钟。由于光发射的时间过程延长，数据采集持续到第 3 天或第 5 天的注射后 40 分钟以及第 7 天的 25 分钟。分箱为 4，视野为 15 厘米。MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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参考文献：[1]. Giuseppe Meroni, et al. D-Luciferin, derivatives and analogues: synthesis and in vitro/in vivo luciferase-catalyzed bioluminescent activity. ARKIVOC 2009 (i) 265-288.[2]. Inoue Y, et al. Timing of imaging after d-luciferin injection affects the longitudinal assessment of tumor growthusing in vivo bioluminescence imaging. Int J Biomed Imaging. 2010;2010:471408.[3]. Rajesh Shinde, et al. Luciferin derivatives for enhanced in vitro and in vivo bioluminescence assays. Biochemistry. 2006 Sep 19;45(37):11103-12.

品牌介绍:&bull;   MCE (MedChemExpress) 拥有200 多种全球独家化合物库，我们致力于为全球科研客户提供前沿最全的高品质小分子活性化合物；&bull;   50,000 多种高选择性抑制剂、激动剂涉及各热门信号通路及疾病领域；&bull;   产品种类涵盖各种重组蛋白，多肽，常用试剂盒 ，更有 PROTAC、ADC 等特色产品，广泛应用于新药研发、生命科学等科研项目；&bull;   提供虚拟筛选，离子通道筛选，代谢组学分析检测分析，药物筛选等专业技术服务；&bull;   设有专业的实验中心和严格的质控、验证体系；&bull;   提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告，确保产品的高纯度、高品质；&bull;   产品的生物活性多经各国客户实验验证；&bull;   Nature, Cell, Science 等多种顶级期刊及制药专利收录了MCE客户的科研成果；&bull;   专业团队跟踪最新的制药及生命科学研究进展，为您提供全球最新的活性化合物；&bull;   与世界各大制药公司及知名科研机构建立了长期的合作。