QinYY的个人博客分享 http://blog.sciencenet.cn/u/QinYY

博文

[转载]土壤β-木糖苷酶 (S-β-XYS)活性检测试剂盒说明书 (货号:NM-W-0632 微量法100T/48S)

已有 166 次阅读 2024-11-6 10:16 |系统分类:科研笔记|文章来源:转载

一、产品简介:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。

S-β-XYS催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在400nm处有特征吸收峰,测定400nm光吸收增加速率,可计算S-β-XYS活性。

二、试剂盒组分与配制:

试剂名称

规格

保存要求

备注

试剂一

自备

4℃保存

甲苯

试剂二

粉剂×1

-20℃保存

临用前加入7mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂-20℃保存

试剂三

液体16mL×1

4℃保存

试剂

液体15mL×1

4℃保存

标准品

液体1mL×1

4℃保存

10mmol/L标准品母液

三、需自备的仪器和用品:

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴/培养箱、天平、可调式移液器、30-50目筛、甲苯、蒸馏水。

四、操作步骤

建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。

2标准溶液的配制:10mmol/L=10000μmol/L标准品母液用蒸馏水稀释成300200100502512.5μmol/L的标准溶液备用。

编号

稀释前浓度(μmol/L

稀释液体积(μL

标准液体积(μL

稀释后浓度

μmol/L

S1

10000

970

30

300

S2

300

300

600

200

S3

200

300

300

100

S4

100

300

300

50

S5

50

300

300

25

S6

25

300

300

12.5

3、预实验上机操作:

 酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm

 操作表

试剂名称(μL

测定管

对照管

标准管

空白管

风干土样(g

0.02

0.02

-

-

试剂一

10

10

-

-

室温振荡混匀15min

90℃振荡混匀15min

-

试剂二

130

-

-

-

蒸馏水

-

130

-

-

试剂

160

160

-

-

充分混匀,37℃水浴/恒温培养箱1h后,立即沸水浴煮沸5min(盖紧缠封口膜,防止水分散失),流水/冰浴冷却10000g25离心10min,取上清液

上清液

70

70

-

-

标准溶液

-

-

70

-

蒸馏水

-

-

-

70

试剂四

130

130

130

130

充分混匀,12000rpm25离心10min,于400nm下读取吸光值A分别记为A测定、A对照、A标准、A空白计算A测定=A测定-A对照管,A标准=A标准管-A空白管。注:每个样本做一个自身对照空白管只需测定1-2

4、正式实验:

 确定好最适实验条件后,正式实验样本制备同预实验样本制备;

 正式实验按照预实验上机操作步骤进行(标准管和空白管预实验已做,正式实验可选做)。

五、结果计算:

1、以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到xµmol/mL

2、单位定义:g土样中产生1μmol-硝基苯酚(PNP定义为一个酶活单位(U)

S-β-XYS活力(U/g土样)=x×V÷W÷T×D=0.0072×x÷W×D

 

T:反应时间,1h=1/24d                  V:反应体系总体积3×10-4L

W:样本质量,g                        D:稀释倍数,未稀释即为1

 

 



https://wap.sciencenet.cn/blog-3289971-1458793.html

上一篇:[转载]土壤酸性木聚糖酶(S-ACX) 活性检测试剂盒说明书 (货号:NM-W-0629 微量法100T/48S)
下一篇:[转载]Biochimie||三种AcSp蛋白的力学和结构特征是新蛛腺形丝不同材料特性的基础
收藏 IP: 221.234.179.*| 热度|

0

该博文允许注册用户评论 请点击登录 评论 (0 个评论)

数据加载中...

Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )

GMT+8, 2024-11-13 06:19

Powered by ScienceNet.cn

Copyright © 2007- 中国科学报社

返回顶部