一、产品简介：

土壤脱氢酶的活性可以反映土壤体系内活性微生物量以及其对有机物的降解活性，以评价降解性能。氢受体2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，被还原为三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），在波长485nm处有最大吸收峰，于485nm测定其吸光值，即得土壤脱氢酶活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30-50目筛、甲醇和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；

2、标准溶液的配制：把40μg/mL标准品母液用甲醇稀释成40、20、10、5、2.5、1.25μg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至485nm。

② 稀释好的标准溶液，各取200uL上清于96孔板，于485nm处读取吸光值A，记为A标准，△A标准=A标准-A空白。

③ 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：建议减少样本质量或延长孵育时间，并将改变后的W和T代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μg/mL）。

2、S-DHA活力计算：

单位定义：37℃时，每g土壤样品每天催化产生1μg TF为一个酶活性单位（U）。

S-DHA活力(U/g土样)=x×V÷W÷T=x÷W

V：反应总体积，1mL；          T：反应时间，24h=1d；

W：土壤样本实际取样量，g；     

注意事项：

1、试剂三易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴口罩，戴乳胶手套操作；

2、如果离心后待测的上清依然浑浊，可尝试加大离心转速或延长时间，例如10000g，4℃，离心20min。