博文

Coelenterazine 是 apoaequorin 和 Renilla 荧光素酶的发光酶底物 |MCE

已有 398 次阅读 2024-9-18 13:09 |系统分类:科研笔记

中文名：腔肠素

CAS：55779-48-1

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：-20°C, protect from light, stored under nitrogen

生物活性：Coelenterazine 是 apoaequorin 和 Renilla 荧光素酶的发光酶底物。海肾荧光素酶和底物腔肠素已被用作生物发光共振能量转移 (BRET) 中的生物发光供体，以检测蛋白质-蛋白质相互作用。 Coelenterazine是一种对超氧阴离子敏感的化学发光探针，也可用于过氧亚硝酸盐的化学发光检测^[1]^[2]^[3] .

体外：瞬时表达海肾荧光素酶 (RLuc) 的 HCT-8 对照细胞由于 P-糖蛋白介导的腔肠素外排转运而显示出低生物发光。相比之下，瞬时表达 RLuc HCT-8 细胞（其中 P-糖蛋白被 shRNAi 下调）显示出高生物发光^[3]。

体内：通过给动物静脉注射腔肠素 (2 mg/kg) 并在 5 分钟后将它们暴露在电荷耦合器件 (CCD) 照相机下，监测 HCC1806-RR 的体内生长潜力。 Rluc 活性被检测为从肿瘤细胞发出的光，并作为叠加在动物黑白照片上的伪彩色图像获得。所有小鼠在原发部位均表现出非常高的 Rluc 活性，大多数小鼠同时显示出向腹股沟 ILN 的转移^[4]。

细胞试验：将细胞以每孔 5×104 个细胞的密度接种到 24 孔板中，并生长至 80-100% 汇合。在成像之前，将培养基更换为含有（以 mM 为单位）的无色溶液：2.7 KCl、139 NaCl、8.1 Na2HPO4、0.7 H2O、1.5 KH2PO4、1.8 CaCl2、1 MgCl2 和 5.5 d-葡萄糖。在不存在或存在 Pgp 调节剂的情况下将细胞预孵育 15 分钟，然后将腔肠素（终浓度 470 nM）直接添加到细胞中[1]。

动物体内实验:小鼠用metofane麻醉，然后尾静脉注射由磷酸钠缓冲液（50 mM）稀释的乙醇储备液配制的腔肠素（4 μg/g）。注射后 2、6、8 和 11 分钟在体内成像系统上进行生物发光成像。成像后，通过颈椎脱位处死动物；然后收获肿瘤并称重[1]。

研究领域：Immunology/Inflammation | NF-κB | Metabolic Enzyme/Protease

作用靶点：Reactive Oxygen Species

参考文献：[1]. Markova SV, et al, Coelenterazine-dependent luciferases. Biochemistry (Mosc). 2015 Jun;80(6):714-32.

[2]. Lucas M, et al. Coelenterazine is a superoxide anion-sensitive chemiluminescent probe: its usefulness in the assay of respiratory burst in neutrophils. Anal Biochem. 1992 Nov 1;206(2):273-7.

[3]. Pichler A, et al. In vivo RNA interference-mediated ablation of MDR1 P-glycoprotein. Clin Cancer Res. 2005 Jun 15;11(12):4487-94.

[4]. Volk-Draper LD, et al. Novel model for basaloid triple-negative breast cancer: behavior in vivo and response to therapy. Neoplasia. 2012 Oct;14(10):926-42.