一、产品简介：

土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用，是评价土壤磷素生物转化方向和强度的指标，也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH有一定的关系。

中性环境中，S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-NP活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30-50目筛、甲苯、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛备用。

【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；

② 催化反应：称取风干土混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯，轻摇15min，加入0.4mL试剂一混匀后，置于37℃水浴锅/恒温培养箱，催化反应24h，计时结束后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化反应。10000rpm，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。

2、标准溶液的配制：把1mg/mL（=1000μg/mL）标准品母液用蒸馏水稀释成800、400、200、100、50、25μg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至610nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将上清液用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μg/mL）。

2、S-NP活力计算：

单位定义：以37℃下后每克土壤中每天生成酚的量（mg）为一个酶活单位(U)。

S-NP活力(U/g土样)=x×V÷1000÷W÷T×D=0.00145x÷W×D

V：催化体系总体积，1.45mL；          T：反应时间，24h=1d；

W：土壤样本实际取样量，g；           D：稀释倍数，未稀释即为1。