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MCE 国际站:KU-55933
CAS:587871-26-9
品牌:MedChemExpress (MCE)
存储条件:Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.
生物活性:KU-55933 是一种有效的 ATM 抑制剂,具有 IC50 和 Ki分别为 12.9 和 2.2 nM,与 DNA-PK、PI3K/PI4K、ATR 和 mTOR 相比,对 ATM 具有高选择性。 IC50 和目标:IC50:12.9 nM (ATM)[1]
体外:KU-55933 (10 μM) 阻断电离辐射诱导的 p53 丝氨酸 15 磷酸化。 KU-55933 在抑制这种 ATM 依赖性磷酸化事件方面具有剂量依赖性作用,估计 IC50 为 300 nM。 KU-55933 消除电离辐射诱导的这些 ATM 底物的磷酸化。 KU-55933 特异性抑制 ATM,但不抑制其他 DNA 损伤激活的 PIKK、ATR 和 DNA-PK[1]。 KU-55933 诱导 pATM、p53、E2F1 和 pATR,在 0.5 小时时间点显着上调 E2F1 的核部分[2]。二甲双胍增加 ATM 和 AMPK 磷酸化,以及原代肝细胞中的 SHP 蛋白水平,二甲双胍的这种刺激作用被特定的 ATM 激酶抑制剂 KU-55933[3] 抑制。
激酶试验:用于体外测定的 ATM 是通过用兔多克隆抗血清在含有 25 mM HEPES (pH 7.4)、2 mM MgCl2、250 mM KCl、500 μM EDTA、 100 μM Na3VO4、10% v/v 甘油和 0.1% v/v Igepal。通过与 Protein A-Sepharose 珠子一起孵育 1 小时,然后通过离心回收珠子,从核提取物中分离出 ATM-抗体复合物。在 96 孔板的孔中,将含有 ATM 的琼脂糖珠与 1 μg 底物谷胱甘肽 S-转移酶-p53N66(p53 的 NH2 末端 66 个氨基酸与谷胱甘肽 S-转移酶融合)在 ATM 测定缓冲液中孵育 [25 mM HEPES (pH 7.4)、75 mM NaCl、3 mM MgCl2、2 mM MnCl2、50 μM Na3VO4、500 μM DTT 和 5% v/v 甘油],37°C,存在或不存在抑制剂。轻轻摇动 10 分钟后,添加 ATP 至终浓度 50 μM,并在 37°C 下继续反应 1 小时。将板在250×g下离心10分钟(4℃)以去除含有ATM的珠子,去除上清液并转移至白色不透明96孔板中并在室温下孵育1.5小时,以使谷胱甘肽S-转移酶-p53N66 结合。然后用 PBS 清洗该板,吸干,并使用磷酸丝氨酸 15 p53 抗体通过标准 ELISA 技术进行分析。磷酸化谷胱甘肽 S-转移酶-p53N66 底物的检测是与山羊抗小鼠辣根过氧化物酶缀合的二抗结合进行的。使用增强型化学发光溶液产生信号,并通过 TopCount 读板器进行化学发光检测。
细胞试验:将 1BR 或 AT4 细胞接种在 10 厘米培养皿中并在第 2 天进行处理(80% 至 90% 汇合)。将细胞与 KU-55933 或载体对照预孵育 1 小时,然后暴露于 5 Gy 的电离辐射。进行细胞周期分布的时间进程,并且选择群体区分的最佳时间为16小时。所有后续实验均在 16 小时时间点进行。根据标准方案用碘化丙啶对细胞进行染色,并使用 FACScalibur 通过 FACS 进行分析。将 60 mm 培养皿中呈指数生长(50-70% 汇合)的 SW620 细胞暴露于 KU-55933 或 DMSO 中 1 小时,然后添加依托泊苷(终浓度为 0.1 和 1 μM)16 小时,然后收获、碘化丙啶染色和分析如上。
热销产品:Vanillic acid | Teplizumab | Theophylline | Rezvilutamide | D-Erythro-dihydrosphingosine | Acetylcarnitine | HRP-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG H&L | Voriconazole | TMP269 | Cariporide
研究领域:Cell Cycle/DNA Damage | PI3K/Akt/mTOR | Autophagy
Trending products:Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Fluorescent Dye | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds | Oligonucleotides
参考文献:[1]. Hickson I, et al. Identification and characterization of a novel and specific inhibitor of the ataxia-telangiectasia mutated kinase ATM. Cancer Res. 2004 Dec 15;64(24):9152-9
[2]. Khalil HS, et al. Pharmacological inhibition of ATM by KU55933 stimulates ATM transcription.Exp Biol Med (Maywood). 2012 Jun;237(6):622-34. Epub 2012 Jun 22.
[3]. Kim YD, et al. Orphan nuclear receptor SHP negatively regulates growth hormone-mediated induction of hepatic gluconeogenesis through inhibition of STAT5 transactivation.J Biol Chem. 2012 Sep 12.
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