一、产品简介：

β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA，EC 3.2.1.39)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解，进而破坏真菌细胞壁，特别是与几丁质酶的协同作用下，可明显抑制真菌的生长。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，以增强植物体对不良外界刺激产生抗性反应，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。  β-1,3-GA 水解昆布多糖，内切 β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、超声清洗仪、可调式移液器、冰、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞，加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积（mL)为500~1000:1比例进行提取。

③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成1.2、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min，调节波长至540nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、按蛋白浓度计算：

酶活定义：每 mg 组织蛋白每小时生成 1 mg 还原糖定义为一个酶活力单位(U)。

β-1,3-GA(U/mg prot)=（x×V1）÷(V1×Cpr) ÷T×D=6×x÷Cpr×D

3、按样本质量计算：

酶活定义：每 g 组织样本每小时生成 1 mg 还原糖定义为一个酶活力单位(U)。

β-1,3-GA(U/g 质量)=(x×V1）÷(W×V1÷V) ÷T×D=6×x÷W×D

4、按细菌/真菌密度计算：

酶活定义：每 10⁴ 个细胞或细菌每小时生成 1 mg 还原糖定义为一个酶活力单位(U)。

β-1,3-GA(U/10⁴ cell)=(x×V1)÷(细胞数量×V1÷V) ÷T×D=6×x÷细胞数量×D

5、按液体体积计算：

酶活定义：每 mL 液体样本每小时生成 1 mg 还原糖定义为一个酶活力单位(U)。

β-1,3-GA(U/mL)=x÷T×D=6×x×D

V：加入提取液体积，1mL；              V1：加入样本体积，0.03mL；

T：反应时间，10min=1/6h；              W：样本质量，g；

细菌或细胞数量：以万计；               Cpr：样本蛋白质浓，mg/mL。