一、产品简介：

葡萄糖 (C₆H₁₂O₆)，是生物体产生能量分子ATP的主要来源，自然界分布最广且最为重要的一种单糖，也是鉴别水果等农产品品质的重要指标之一。  采用GOPOD氧化酶法对葡萄糖进行检测：葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，GOD）催化葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放H₂O₂；过氧化物酶（Peroxidase，POD）催化H₂O₂氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成红色醌类化合物，通过吸光值变化即可定量检测葡萄糖的含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、超声清洗仪、可调式移液器、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取0.1g 组织，加入1mL蒸馏水进行冰浴匀浆，置沸水浴中煮沸10min(盖紧，防止水分散失），冷却至室温，8000g，25℃离心10min，取上清待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细胞加入1mL蒸馏水，超声波破碎细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；置沸水浴中煮沸10min(盖紧，防止水分散失），冷却至室温，8000g，25℃离心10min，取上清待测。【注】:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则需8000g，25℃离心10min，取上清待测。

2、标准溶液的配制：把50 μmol/mL标准品母液用蒸馏水稀释成4、2、1、0.5、0.25、0.125 μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长到505nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

2、按照组织蛋白浓度计算：

葡萄糖含量(μmol/mg prot)=x×V1÷（Cpr×V1）×D=x÷Cpr×D

3、按照样本质量计算：

葡萄糖含量(μmol/g质量)=x×V1÷(W×V1÷V) ×D=x÷W×D

3、按照细胞数量计算：

葡萄糖含量(μmol/10⁴ cell)=x×V1÷(N×V1÷V) ×D=x÷N×D

4、按照液体体积计算：

葡萄糖含量(μmol/mL)=x ×D

V：加入提取液体积，1mL；                V1：加入样本体积，0.02mL；

W：样本质量，g；                        N：细胞数量，以万计；

D：稀释倍数，未稀释即为1；              Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。