一、产品简介：

植物叶绿素（chlorophyll）广泛存在于绿色植物组织中，其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。

叶绿素a和叶绿素b在649nm和665nm处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b以及总叶绿素含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、锡箔纸、可调式移液器、无水乙醇、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

①取新鲜植物叶片（去掉中脉）或其它绿色组织，用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，称取约0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。

②加入1mL提取液，少量试剂一（约50mg），务必在黑暗或弱光条件下充分研磨（难磨叶片可以添加少量石英砂助磨），然后转移至10mL离心管或玻璃试管中。

③用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液及研钵中所有的绿色物质转入10mL离心管中，用提取液补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节双波长至649nm和665nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 当测定吸光值超过1.0时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数D；若测定吸光值小于0.05时，可适当减少提取过程中提取液的用量后再进行测定，计算时相应调整（按实际提取后总体积调整计算公式中 V）；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行。

五、结果计算：

Ca（mg/L）=27.9×ΔA665-13.76×ΔA649

Cb（mg/L）=49.92×ΔA649-14.64×ΔA665

C_T（mg/L）=36.16×ΔA649+13.26×ΔA665

叶绿素a含量（mg/g 质量）=Ca×V×D÷W =0.01×Ca×D÷W

叶绿素b含量（mg/g 质量）=Cb×V×D÷W =0.01×Cb×D÷W

叶绿素总含量（mg/g 质量）=CT×V×D÷W =0.01×C_T×D÷W

V：加入提取液体积，0.01L；              D：稀释倍数，未稀释即为1；  

W：样本质量，g。

注意事项：

1、为了避免色素见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。；

2、提取液易挥发，操作时做好防护措施。