单宁含量检测试剂盒说明书

(货号：NM-W-0122  微量法100T/96S)

一、产品简介：

单宁是葡萄酒中所含有的两种酚类化合物其中的一种物质，尤其在红葡萄酒中含量较多，有益于心脏血管疾病的预防。

本试剂盒利用单宁在碱性环境下与磷钼酸反应，生成蓝色化合物，通过测定该生成物在750nm处有最大吸收峰来实现对单宁的定量检测。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30-50目筛、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取约0.1g新鲜样本；或者称取约0.02g烘干样本（将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛，得到烘干样本），加入1mL提取液，80℃水浴提取30min，12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

2、标准溶液的配制：把2mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至750nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、按照样本蛋白浓度计算：

单宁含量(mg/mg prot)=x×V÷(Cpr×V)×D=x÷Cpr×D

3、按照样本质量计算：

单宁含量(mg/g质量)=x×V1÷(W×V1÷V)×D=1.5x÷W×D

V：加入提取液体积，1.5mL；           V1：反应中样本体积，0.01mL；

W：样品质量，g；                     D：稀释倍数，未稀释即为1；

Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。