一、产品简介：

体系内各种抗氧化大分子、小分子和酶的总水平，反映了该体系内的总抗氧化能力（T-AOC）。T-AOC能更全面地评价体液、细胞和组织匀浆、食品和饮料的抗氧化剂含量，广泛应用于医学、食品科学等相关研究。

在酸性环境下，抗氧化物质还原Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的Fe²⁺-TPTZ的能力反映了总抗氧化能力。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、甲醇、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取0.1g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 液体样本：水溶性样本可直接检测。若是油性样本，可用提取液溶解后再取上清检测。

2、标准溶液的配制：把50μmol/mL标准品母液用提取液稀释成8、4、2、1、0.5、0.25μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至590nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

2、定义：用从标准曲线上获得的抗氧化剂的量来表示样本的总抗氧化能力。

3、按蛋白浓度计算：

总抗氧化能力(μmol/mg prot)=x×V1÷(V1×Cpr)×D=x÷Cpr×D

4、按样本质量计算：

总抗氧化能力(μmol/g质量)=x×V1÷(V1÷V×W)×D=x÷W×D

5、按液体样本计算：

总抗氧化能力(μmol/mL)=x×D

V：加入提取液体积，1mL；          V1：反应中样本体积，0.005mL；

W：样本质量，g；                   D：稀释倍数，未稀释即为1；

Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。

注意事项：

1、由于本方法是显蓝色测定吸光度值，因此尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或者接近蓝色的样本，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰；

2、样本中样本中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。