植物源抗狂犬病毒感染单克隆抗体的效力比较方法

摘要

狂犬病脑炎是一种致命的人畜共患病毒性疾病，由嗜神经狂犬病病毒引起。它仍然是一个主要的公共卫生问题，因为它导致几乎100%的死亡率，并且在发病后没有有效的药物治疗。然而，这种疾病是可以通过及时给予有效的暴露后预防(PEP)来预防的，包括狂犬病疫苗和被动免疫球蛋白(HRIG和ERIG)。最近，常规PEP显示出许多局限性，导致对这些昂贵的异源球蛋白的支持很少。引入了通过动物和人类细胞培养物中的重组技术以及基于植物的平台生产单克隆抗体(mAb )，以克服以前制剂的高成本和高技术限制。2004年，我们利用瞬时表达技术制备了两株抗狂犬病毒的单克隆抗体并比较了它们在体外和体内的病毒中和活性。植物中选择性单克隆抗体E559和62-71-3的表达水平估计分别为17.3毫克/千克和28.6毫克/千克鲜重。植物产生的单克隆抗体在基于细胞的RFFIT中有效中和了攻击病毒CVS-11株。此外，这两种单克隆抗体在鸡尾酒中的组合比标准HRIG和ERIG更有效地保护仓鼠免于狂犬病病毒感染。这项研究表明，植物产生的狂犬病抗体鸡尾酒有望成为狂犬病PEP中多克隆RIG的替代生物。

关键词:

狂犬病病毒; 暴露后预防; 单克隆抗体; 本氏烟草; 植物产生的抗体混合物

1.介绍

狂犬病病毒(RABV)在人类和动物中引起脑脊髓炎。RABV感染的主要挑战之一，如感染个体中无法检测到的病毒中和抗体水平，对这种疾病的死亡人数有显著影响。然而，在某些公认的暴露后，及时给予暴露后预防(PEP)已被证明对预防该疾病非常有效。推荐的PEP治疗包括立即清洗伤口、多剂量狂犬疫苗主动免疫以及来自高度免疫的人(HRIG)或马(ERIG)的狂犬免疫球蛋白(RIG)被动免疫。PEP的目标是防止RABV进入神经系统，最终导致死亡。尽管狂犬病生物制剂的发展取得了进展，但HRIG和ERIG都很昂贵且供应有限，这限制了获得足够PEP的途径。此外，RIG在不同批次之间具有不同的功效，容易受到血源性风险因子的污染，并且在ERIG的情况下，可能会导致一些不良过敏反应。出于这些原因，一些研究工作已经着手寻找不同的替代方案。

世界卫生组织狂犬病合作中心(WHO RCCs)已经鉴定了五种具有RABV中和活性的鼠源性单克隆抗体，其中四个靶向病毒糖蛋白1的抗原位点II，一个靶向抗原位点I。它们被开发为更安全的下一代PEP的潜在成分。由于其高特异性和效力，以及其临床和商业上的成功，中和狂犬病的单克隆抗体是标准RIG的有吸引力的替代品。先前的研究表明，狂犬病特异性单克隆抗体可以在RABV感染后保护啮齿动物。在鉴定的治疗性单克隆抗体中，E559具有最宽的RABV中和宽度和最大的效力。同时，其他单克隆抗体包括M727-5-1、M777-16-3、1112-1和62-71-3。

基于单克隆抗体的治疗有许多优点，如改善的一致性和安全性，以及人性化，更好的患者耐受性。植物是生产单克隆抗体的可行且有竞争力的平台，因为它们生产成本低，能够装配多聚体蛋白，并且具有高度的可扩展性。先前的研究已经证明狂犬病单克隆抗体(R-mAb) E559和62-71-3在烟草(烟草)叶子表达，并且植物产生的R-mAbs在体外有效中和RABV并在仓鼠攻击模型中赋予保护作用。更重要的是，这些植物产生的R-mab在体内比HRIG具有更高的保护活性。然而，由于单个中和性R-mab对RABV糖蛋白上的不同表位具有特异性，两种或更多种靶向非重叠表位的非竞争性R-mab的混合物可以提供更大的特异性和效力。迄今为止，世卫组织已经提出了由mAb 62-71-3和mAbs E559、M727-5-1、M777-16-3或1112-1之一组成的鸡尾酒，mAb 62-71-3与抗原位点I的表位结合。鉴于E559的广泛中和范围，正在考虑将其纳入RIG替代混合物。在中和性mAb的混合物中使用E559和62-71-3，因为每种mAb靶向RABV糖蛋白的不同表位，可以提供针对广谱RABV分离株的覆盖，防止病毒逃逸，并且具有与商业RIG相当或更好的效力。之前的研究为研发R-mAb鸡尾酒(E559和mAb 62-71-3)提供了基础；然而，在动物模型中，多单克隆抗体治疗是否能增加狂犬病毒的中和作用还有待证实。

目前的研究描述了基于植物的重组单克隆抗体的生产和R-单克隆抗体E559和62-71-3在体外和体内的功能特征。这两种R-mAb候选物表达于本氏烟草并用蛋白A的亲和色谱纯化。对植物产生的R-mab进行了体外效力测试，并在基于细胞的RFFIT分析中显示了对标准攻击病毒(CVS11株)的有效病毒中和。此外，在使用泰国分离的狂犬病病毒和分离株338 PJm的仓鼠暴露后病毒攻击中，植物表达的R-mAbs显示了体内效力，其中E559显示出高效力，62-71-3 mAb至少与标准HRIG一样有效。此外，与基于单个植物的R-mAb和常规RIG相比，R-mAb鸡尾酒具有增强的体内效力。临床狂犬病的减少决定因素是生物学功效的基本参数。

2.材料和方法

2.1.烟草中植物源狂犬病单克隆抗体的研究

根癌土壤杆菌含有E559质粒的细胞和62-71-3基因从临床科学部感染和免疫研究中心(英国伦敦圣乔治大学)获得。大约4-5周大本氏烟草植物在16小时光照/8小时黑暗周期下生长并用于实验。将细菌培养物培养在补充有25毫克/升利福平、50毫克/升羧苄青霉素和50毫克/升卡那霉素的抗生素选择性鲁利亚-贝尔塔尼肉汤中，在28℃下持续振荡(200转/分)直至OD600约为0.1，然后用真空室将其渗入到 N. 弯孢菌中。浸润的植物在28℃下培养7天，仅收获浸润的叶子。该植物产生E559和62-71-3单克隆抗体，其通过将叶子与磷酸盐缓冲盐水(PBS)混合来提取。然后将粗提液离心并澄清，上清液用蛋白A的亲和层析柱进一步纯化。简而言之，将粗裂解物装载到填充有蛋白A珠的柱上(Expedeon，剑桥，英国)。洗涤蛋白质，使用pH 2.7的洗脱缓冲液洗脱重组E559和62-71-3单克隆抗体，并立即中和至最终pH 7.4。使用Amicon通过超滤浓缩纯化的蛋白质®超离心过滤器(德国达姆施塔特默克公司)。通过SDS-PAGE和蛋白质印迹技术估计植物产生的E559和62-71-3的分子量，并使用特异性抗体，即山羊抗人IgG-HRP和山羊抗人κ-HRP进行检测。

2.2.分析狂犬病单克隆抗体浓度

使用夹心ELISA方法测定植物产生的E559和62-71-3的蛋白质浓度。简而言之，在4℃下用羊抗人IgG多克隆抗体(Abcam，Cambridge，UK)包被96孔板过夜作为捕获抗体。用含有0.05%吐温20 (PBS-T)的PBS洗涤该板三次，并用5%脱脂乳封闭。将市售人IgG1 (Abcam，Cambridge，UK)用作标准品，并以高达125.000 ng/mL的各种浓度连续稀释两倍，同时也稀释E559和62-71-3抗体以优化吸光度并在标准吸光度范围内填充。每个样品浓度都是一式两份，并添加到平板上。孵育后，用PBS-T洗涤平板以减少抗原或抗体的非特异性结合。山羊抗人κ-HRP抗体(Southern Biotech，Birmingham，AL，USA)用于检测，并加入每个孔中。与检测抗体一起孵育后，用PBS-T洗涤平板三次。将3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)溶液预热至室温，加入到平板中，孵育直至溶液颜色改变。用 1 M H₂SO₄ 停止酶促反应，用微孔板阅读器测量 OD450 的显色情况。利用标准IgG1的吸光度来构建标准曲线，然后分别用于计算E559和62-71-3的浓度。

2.3.快速荧光焦点抑制试验

我们使用RFFIT技术测量了单克隆抗体的抗原单位，如前所述。在MEM-10(含有10%胎牛血清的Eagle最小必需培养基)中制备植物表达的mAb的5倍系列稀释液，在 8 孔组织培养室载玻片中分析每个测试-mAb 稀释液 50 μL(LabTek®， Thermo Fisher Scientific， Waltham， MA， USA).。定量的100 μL标准攻击病毒(CVS-11 )，含有1 × 10⁴将FFD50 (50%成焦点剂量)加入每个孔中，并使混合物在CO₂  37℃培养箱。小鼠神经母细胞瘤(MNA)细胞从泰国公共卫生部医学科学部获得，大约5 × 10⁴向每个孔中加入MNA细胞。载玻片在CO₂中再培养20小时，37℃，然后用冰冷的80%丙酮固定，并用FITC偶联的抗RABV抗体(Fujirebio Diagnostics，Inc .，Malvern，PA，USA)在37℃下染色30分钟。在荧光显微镜下用40倍物镜观察每个孔中的20个微观区域，并对荧光细胞的存在进行计数。根据Reed-Muench公式计算单克隆抗体的抗原性。将这些值与参考血清(从英国Herts的国家生物标准和控制研究所获得)的值进行比较，并标准化为国际单位(IU/mL)。检测下限为0.1 IU/mL。

2.4.道德声明

该项目名为“烟草生产的抗体内狂犬病病毒感染单克隆抗体的功效研究”，ACU编号为QSMI-ACUC-10-2020，于2021年3月1日获得泰国红十字会萨瓦巴女王纪念研究所动物护理和使用委员会的批准。

2.5.狂犬病病毒(RABV)制剂

犬RABV，TDRBV-QSMI2(分离株338 PJm)最初是在我们的狂犬病诊断实验室设施从自然感染的狗中分离的。从匀浆中制备病毒悬液，并离心20%(w/v)的狗脑来清除碎片。收集上清液并储存在80℃下。将约30 μL狗脑悬液接种到断奶小鼠的颅内。在表现出狂犬病的典型症状后，对小鼠实施安乐死，并收集它们的大脑。通过断奶小鼠的颅内接种进行另外7次连续传代，以表征临床症状的发作。

2.6.仓鼠攻毒试验

每个实验组包括10只6周大的金色叙利亚仓鼠(金黄中仓鼠在诱导室中用异氟烷麻醉仓鼠，然后通过IM途径用43 × MICLD₅₀感染通过直接接种到右侧腓肠肌中。

感染后4小时，在诱导室中给仓鼠吸入快速麻醉剂异氟烷，进行胃肠外PEP给药。动物接种Verorab®疫苗(灭活狂犬病疫苗；批次T1A621M，由Sanofi Pasteur，Lyon，France制造)在第0、3、7和14天通过肌肉注射给药于左侧腓肠肌，等比例换算剂量为20 μL。HRIG(批次HRG-63001，含有5 mL小瓶，由泰国国家血液中心，泰国红十字会制造，含有172.4 IU/mL)的分配剂量为20 IU/kg，而ERIG(批次RF-00319，含有200 IU/mL，由Saovabha皇后纪念研究所制造每天观察实验仓鼠两次。研究的人道终点定义为一侧或两侧出现后肢瘫痪，实验终点根据观察到的临床症状确定。使用直接荧光抗体技术(DFA)测试大脑样本以确定病毒的存在。感染后存活28天的仓鼠被二氧化碳安乐死。

2.7.等比例换算剂量

PEP方案的剂量已被批准用于人类，未经适当修改，不应直接推断用于动物。之前的一项研究建议，在人体当量剂量(HED)和物种之间转换计算会改变动物当量剂量(AED)，方法是通过体表面积(BSA)标准化来分配所有生物制剂的剂量。

2.8.基于BSA的剂量转换公式

动物当量剂量(AED) =人类当量剂量(HED) × Km值

Km值=为一系列体重计算的每个物种特有的恒定值

使用Km = 100/K × W0.33

(成年人的Km = 37，仓鼠的Km = 5)。

2.9.统计分析

使用Kaplan-Meier方法对数据进行简单的生存曲线分析，并使用对数秩检验进行统计比较。GraphPad Prism用于绘制图表，而p值< 0.05被认为具有统计学意义。

3.结果

3.1.植物产生的R-mAbs E559和62-71-3的表达和纯化

R-mAbs E559和62-71-3在本氏烟草并通过蛋白A的亲和层析柱纯化，纯化后的产率为鲜重17.3和28.6 mg/kg。因此，纯化的植物产生的R-mab的纯度和大小通过SDS-PAGE和Western blot确定。在还原条件下，R-mAb E559重链蛋白的大小与约50 kDa的理论大小相关，但轻链大小显示出略大于25 kDa的两条蛋白带(图1b，1道)。另一方面，纯化的植物产生的E559在非还原条件下显示约150 kDa的蛋白质带(图1f，第3泳道)。在蛋白质印迹分析中，纯化的植物产生的E559的重链和轻链，以及其装配成具有两条重链和轻链的完整抗体，通过抗κ(图1c，g，泳道1和3)和反γ(图1d，h，泳道1和3)在还原和非还原条件下。这些结果类似于人IgG对照标准(图1A，e，泳道A)。纯化的植物产生的R-mAb 62-71-3也使用相同的方法在还原(图1b，泳道2)和非还原性(图1f，泳道4)条件。蛋白质的大小和模式与即时蓝色®染色与标准人IgG相当，蛋白质印迹结果显示抗κ和抗γ抗体都可以在还原(图1c，d，泳道2)和非还原性(图1g，h，泳道4)条件。基于即时蓝染色数据(图1b，f，泳道1-4)，植物来源的R-mAbs E559和62-71-3成功纯化(主要条带用黑色箭头表示)，基于目测纯度约大于80%。

图1. 用SDS-PAGE测定R-mAb大小(a，b，e，f)，以及蛋白质印迹(c，d，g，h).M，蛋白质标记；a、标准人IgG; 1、E559还原条件；2、62-71-3还原条件；3、E559非还原条件；4、62-71-3非还原条件；水平粗箭头，重链大小；斜粗箭头，轻链大小；虚线水平箭头；天然形式的R-mAb。

3.2.植物产生的R-mAbs E559和62-71-3对RFFIT的体外研究

已知两种植物产生的R-mab，E559和62-71-3，靶向RABV糖蛋白上不同的互补位点.在目前的研究中，有必要确定基于烟草的R-mab是否具有功能性以及是否与类似的研究不一致,以及根据国际单位/毫升(IU/mL)来估计针对RABV的抗体浓度。

为了测试和比较RABV实验室分离株(CVS11株)上植物产生的mAbs和HRIG的覆盖范围，进行了快速荧光焦点抑制试验(RFFIT)方法。结果显示植物产生的R-mAb E559的抗体浓度为807.6 IU/mL，植物产生的R-mAb 62-71-3的抗体浓度为546.2 IU/mL。同时，常规HRIG具有1 IU/mL的抗体浓度。IU/mL数据用于计算制备用于动物给药的抗体混合物所需的抗体比率。因此，我们改变了两种植物产生的R-mab(E559:62-71-3)的比例，以中和RABV为1:1、1:2和2:1，并发现不同混合比例的终点没有显著性。因此，我们将混合物E559:62-71-3配制成1:1，并将体积调整为每只动物50 L，在适用的情况下为20 IU/kg或40 IU/kg。

3.3.植物产生的R-mAbs E559和62-71-3的体内研究

为了评估植物产生的R-mAbs在体内的效力，每组中的10只仓鼠通过IM途径用RABV分离株338 PJm以43×MICLD₅₀通过在暴露后预防(PEP)前直接接种到右侧腓肠肌4小时。动物接种Verorab®疫苗通过左侧腓肠肌肌内注射，等比例换算剂量为20 μL。分配剂量为20 IU/kg，ERIG为40 IU/kg。在该试验中，用攻击RABV感染所有仓鼠，然后给予模拟PEP、疫苗或R-mAbs。基于这些结果，下列治疗后的存活率为0%(表1)。用PBS(第1组)或仅用疫苗(第2组)处理的仓鼠在13天后死亡。同时，接受20 IU/kg(第3组)和40 IU/kg(第4组)鸡尾酒R-mAbs的动物分别在19天和14天后死亡。在组合方案的情况下，用疫苗和被动球蛋白治疗导致更高的存活率，在接受常规PEP和HRIG后，50%的仓鼠存活(第5组)，在接受PEP和ERIG后，30%的仓鼠存活(第6组)。值得注意的是，疫苗与植物产生的R-mAb混合物(E559:62-71-3)的组合治疗也将受攻击动物的存活率提高了高达90%。在用20 IU/kg(第7组)或40 IU/kg(第8组)的鸡尾酒R-mAbs进行疫苗治疗后，针对RABV攻击的存活率分别为60%和90%。此外，用疫苗与E559单克隆抗体(第9组)或62-71-2单克隆抗体(第10组)联合治疗的仓鼠的存活率分别为70%和50%(表1).

表1.狂犬病毒分离株338 PJm感染后的仓鼠存活率，然后施用R-mAbs。

在用RABV分离株338 PJm(图2).基于这些结果，仅用疫苗治疗的50%的动物没有存活超过感染后8天(dpi)。随后，感染对照组和疫苗治疗组的所有动物在第13天死亡。同时，给予20或40 IU/kg植物产生的R-mAb混合物的动物在12 dpi时显示50%的保护作用，这比在精确时间点观察到的对照组和疫苗组的保护作用稍大。然而，施用40 IU/kg植物产生的R-mAb混合物的动物100%在14 dpi内死亡，而施用20 IU/kg植物产生的R-mAb混合物的动物100%在19天后死亡。总之，这些发现表明疫苗或抗体治疗本身在体内中和RABV分离株338 PJm是无效的。

图2.在对照组(模拟)、疫苗组和有尾植物单克隆抗体组中存活的动物数量。

在这里，我们也提出了一个工厂生产的R-mAb鸡尾酒与传统PEP的头对头比较。与疫苗组合，40和20 IU/kg的抗体鸡尾酒显示出比疫苗加HRIG或ERIG的组合更高的存活率(图3)。R-mAb鸡尾酒提高了狂犬病疫苗的效力，大约90-100%的受攻击仓鼠在RABV感染8天后仍然存活，相比之下，接受HRIG或ERIG的动物只有70-80%存活。在研究终点，40 IU/kg的R-mAb鸡尾酒的存活率保持在90%，而HRIG或ERIG的存活率分别下降到50%和30%。

图3.在常规PEP和20 IU/kg和40 IU/kg的鸡尾植物单克隆抗体组中存活的动物数量。

然而，在接受40 IU/kg疫苗和R-mAb混合物的组和接受20 IU/kg疫苗和R-mAb混合物的组之间的存活曲线没有统计学显著差异(p = 0.10)。

还比较了植物产生的单克隆抗体和R-单克隆抗体混合物的效率，抗体混合物在保护方面优于单个单克隆抗体(图4)。简而言之，在所有植物产生的单克隆抗体治疗中，40 IU/kg的R-单克隆抗体鸡尾酒与狂犬病疫苗的组合表现出最佳的保护效果，动物存活率为90%。接受40 IU/kg疫苗和R-mAb混合物的组中的存活曲线不同于接受疫苗和HRIG的组(p= 0.03)以及疫苗和ERIG(p= 0.004)。令人惊讶的是，疫苗加E559单克隆抗体显示出比62-71-3单克隆抗体甚至R-单克隆抗体鸡尾酒更高的存活率，所有都在20 IU/kg的相同剂量下。这些发现表明E559单克隆抗体是有效的，并增加了疫苗在受攻击仓鼠中的效力。总的来说，结果显示40 IU/kg的R-mAb混合物优于传统的RIG，并且工厂生产的20 IU/kg的62-71-3 mAb至少与标准HRIG和疫苗治疗一样有效。

图4.在疫苗接种过程中，在植物产生的单克隆抗体组和尾状植物产生的单克隆抗体组中存活的动物数量。

4.讨论

世卫组织建议除了狂犬病疫苗外，至少使用两种单克隆抗体进行狂犬病暴露后预防(PEP)。这种传统的PEP防止病毒逃避，增强病毒中和效力，并覆盖广泛的病毒株。目前，只有两种含有抗狂犬病病毒(抗RABV)单克隆抗体的市售PEP产品可用，两种单克隆抗体鸡尾酒正在临床试验中测试，下面简要描述。首先，Serum Institute of India Pvt. Ltd .(印度浦那)和MassBiologics(美国马萨诸塞州马特潘)发布了一种名为“Rabishield”的单克隆抗体，这种抗体是从含有人免疫球蛋白的转基因小鼠中开发出来的。然后，分离B细胞并选择最高的RABV特异性抗体。然而，Rabishield仅包含一种单克隆抗体，不符合世卫组织建议.第二，荷兰的Crucell公司开发了一种人单克隆抗体混合物，包含两种单克隆抗体，CR57和CR4098，来源于携带人免疫球蛋白的转基因小鼠。该产品已经在印度、菲律宾和美国进行了1期和2期临床试验, 然而它并没有走向商业化。第三，Zydus Cadila开发了Twinrab，这是第一个商业化的狂犬病特异性单克隆抗体鸡尾酒，于2020年在印度发布。单克隆抗体鸡尾酒含有单克隆抗体M777-16-3和单克隆抗体62-71-3，建议剂量为40 IU/kg。最后，Synermore Biologics开发了SYN023，这是一种包含两种人源化单克隆抗体的单克隆抗体鸡尾酒:CTB011和CTB012。单克隆抗体混合物具有结合和中和来自10个中国狂犬病病毒分离物和10个美国狂犬病病毒分离物的20种病毒的能力。迄今为止，SYN023的3期临床试验已经开始。

所有抗狂犬病单克隆抗体，无论是市售的还是接近市售的，都是在基于细胞的系统中生产的，并且非常昂贵，而源自基于植物的系统的单克隆抗体的生产成本较低。为了考虑烟草叶片和哺乳动物细胞(即CHO细胞)中瞬时蛋白表达之间的mAb生产过程，iBio CMO有限责任公司(一家植物生产疫苗和抗体的公司)在1 g/L(哺乳动物细胞)和1 g/kg(鲜重烟草)的粗mAb生产中使用了模拟模型。哺乳动物细胞可生产250千克/年，完全纯化后回收70%的蛋白质，生产成本大致为6500万美元/年，用于制造同时，烟叶可生产300公斤/年，蛋白质回收率为65%，生产成本为3300万美元/年，用于制造这些数据表明，在等量的植物产生的和哺乳动物细胞产生的mAb生产中，植物产生的便宜约50%。因此，由于上述高蛋白质回收率和低生产成本，植物产生的R-mAb，例如来自烟叶的R-mAb，是另一种令人感兴趣的技术。

抗RABV单克隆抗体的生产和开发不断取得进展。尽管没有产品获得批准，工厂生产的R-mab 62-71-3和E559本氏烟草浓度分别为546 IU/mL和807 IU/mL的叶片有望进一步开发。由于这两种抗体具有不同的结合位点，它们可以同时与RVG结合。这些R-mab的组合可以提高广谱RABV的中和作用，并使病毒逃逸的可能性最小化。世卫组织建议患者使用的HRIG剂量为20IU/kg，ERIG剂量为40IU/kg。因此，我们的两种工厂生产的R-mab都可能是潜在的和令人感兴趣的候选物，以进一步开发用于患者。先前的研究表明证明烟草产生的E559和62-71-3在体内比HRIG更有效，这与我们的发现一致，显示20 IU/kg剂量的mAb E559比HRIG和20 IU/kg剂量的mAb 62-71-3更有效，其具有与HRIG相当的中和效力。尽管如此，植物产生的R-mab(如E559和62-71-3)的组合对狂犬病病毒的中和作用尚未得到测试。因此，我们的研究首次表明，鸡尾酒烟草生产的E559和62-71-3比它们中的任何一种都更能提高动物存活率。

5.结论

我们已经证明了在大肠杆菌中快速瞬时表达和生产植物产生的E559和62-71-3狂犬病单克隆抗体(R-mAbs)的可行性。在仓鼠模型攻击中测试了这些R-mab的混合物的体外功效，发现其在暴露后预防方面优于常规RIG。总之，这项概念验证研究揭示了使用植物表达系统生产特异性抗狂犬病病毒球蛋白的优势，从而为人类提供更安全、更有效的生物制剂。

Lumlertdacha B， Mahong B， Rattanapisit K， Bulaon CJI， Hemachudha T， Phoolcharoen W. Efficiency Comparative Approach of Plant-Produced Monoclonal Antibodies against Rabies Virus Infection. Vaccines (Basel). 2023 Aug 17;11(8):1377. doi: 10.3390/vaccines11081377. PMID: 37631945.