注册 |登录

银花世界的研究者分享 http://blog.sciencenet.cn/u/CAU05077

博文

PROTOCOL目录

已有 2753 次阅读 2014-6-21 16:01 |系统分类:科研笔记

目   录

 

A级人才自尊心... 7

真正的魔法... 7

对产品的直觉... 8

PROTOCOL（14-06-20）... 9

1 植物种植与病菌培养... 9

1.1 棉花水培营养液配方... 9

1.2 棉花嫁接方法——劈接法... 10

1.3 棉花田间高效插劈接技术... 10

1.4 拟南芥种植方法--铺板与移栽... 12

1.5 培养基——PDA培养基的配制... 12

1.6 培养基——查氏液体培养基... 14

2. 组织培养与原生质体操作... 16

2.1 组培常用药品的配制及注意事项... 16

2.2 常用抗生素等的配制方法... 17

2.3 MS培养基母液配制... 17

2.4棉花胚性愈伤诱导与植株再生... 19

2.4A棉花组织培养... 20

2.5 棉花细胞悬浮系的建立... 21

2.6 棉花原生质体操作与细胞融合... 22

2.7 棉花原生质体活性检测... 24

2.8 原生质体培养与融合... 26

2.9 亚细胞定位载体转化洋葱表皮... 29

2.10流式细胞仪检测法... 30

3. 根瘤农杆菌与VIGS介导的遗传转化... 32

3.1 农杆菌感受态细胞的制备及其转化... 32

3.2 农杆菌花器浸泡法转化拟南芥... 33

3.3 农杆菌介导烟草转化方法（叶盘法）... 33

3.4 农杆菌介导的珂201胚性愈伤转化体系... 34

3.4B根癌农杆菌介导棉花愈伤组织遗传转化... 36

3.5 农杆菌介导的棉花茎尖转化体系... 38

3.6 花粉管通道法转化棉花... 39

3.7 农杆菌介导喷花的棉花转基因方法... 39

3.8 农杆菌介导滴涂花柱棉花转基因方法... 40

3.9棉花VIGS技术应用系统... 41

4. DNA提取与检测... 44

4.1 棉花DNA提取与主要试剂配制... 44

4.2 棉花总DNA提取方法... 46

4.2B 棉花DNA的抽提（CTAB法）及浓度测定... 47

4.3小量法提取棉花基因组DNA（CTAB法）... 49

4.3A 棉花总 DNA的快速少量抽提程序（CTAB法）... 50

4.4 棉花叶绿体DNA提取... 52

4.5 棉花线粒体DNA提取... 54

4.6棉花线粒体RNA提取... 55

4.7 黄萎病菌DNA提取方法... 56

4.8 细菌质粒DNA的小量制备（碱裂解法）... 56

4.9  PCR产物纯化... 58

5. RNA提取与检测... 59

5.1 棉花总RNA提取相关试剂的配制... 59

5.2 （CTAB+SDS）法提取棉花总RNA.. 61

5.3 棉花总RNA的CTAB法提取... 62

5.3A 棉花总RNA的CTAB法提取... 65

5.4 棉花RNA 提取（异硫氰酸胍法）... 69

5.5 拟南芥及烟草RNA快速提取法... 70

5.6 外源RNase去除... 71

5.7  RNA中的基因组DNA的消化... 72

5.8  PolyA+ mRNA浓缩... 72

5.9 Poly A+ mRNA分离... 73

5.10  RNA电泳检测和定量... 74

6. 核酸扩增与分子标记... 75

6.1 SSCP电泳... 75

6.2 非变性聚丙烯酰胺凝胶... 75

6.3 非变性丙烯酰胺凝胶染色方法（银染法）... 76

6.4 变性聚丙烯酰胺凝胶制备... 77

6.4A  变性PAGE凝胶电泳方法... 78

6.5 聚丙烯酰胺凝胶银染方法——快速银染法... 78

6.5A 聚丙烯酰胺凝胶银染方法... 79

6.6 Genome Walking方法扩增基因启动子... 81

6.7 快速扩增cDNA末端（GeneRacerTMKit）... 85

6.8 AFLP标记... 89

6.9  SSR标记... 91

6.10  SRAP标记... 92

6.10A  聚丙烯酰胺凝胶电泳（备查）... 92

7. 分子杂交... 96

7.1 SouthernBlotting. 96

7.2  Southern blotting（同位素标记法）... 100

7.3  Northern Blotting. 107

7.4  Northern Blotting（同位素标记法）... 108

7.5  Western blot操作流程... 112

8. 文库构建及相关... 122

8.1大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化... 122

8.2  Fosmid文库构建... 123

8.3 全长文库构建说明书... 128

8.4 一种高效筛选文库的菌液PCR方法... 135

8.5 抑制差减cDNA的获得... 137

8.6 文库保存... 143

8.7 地高辛标记及检测... 144

8.8 毕氏酵母感受态制备与PEG1000转化方法... 147

8.8B 酵母感受态制作及转化... 148

8.9 酵母双杂交试验... 149

8.10 X-光胶片显影、定影步骤... 151

9 引物... 153

9.1 引物保存、使用与管理... 153

9.2 实验室合成引物情况统计... 155

9.3 引物分布示意图... 156

9.4      实验室全部SSR引物分类汇总表(计21570对引物)158

9.5实验室现合成引物清单打印情况... 160

9.6 引物使用情况登记表... 161

10. 植物组分测定与观察... 162

10.1 凯氏法测定植物粗蛋白... 162

10.2 植物蛋白提取、双向电泳及凝胶染色... 163

10.2A  总RNA提取及浓度、纯度检测... 169

10.3 植物激素的ELISA测定法... 170

10.4 化学法测定棉籽仁油份——索氏提取法... 174

10.4 A 棉籽油份化学方法提取步骤... 175

10.5 近红外光谱法测定棉籽油份含量... 176

10.6  GUS组织化学染色技术... 177

10.7  棉花组织水平上的微管免疫抗体染色方法... 178

10.8 棉花根组织透明染色方法... 180

11. 实验仪器的使用说明... 181

11.1 灭菌锅使用说明... 181

12. 附录... 182

12.1 分子克隆中常用试剂和溶液配方... 182

12.2 实验操作指南Protocols. 185

Protocol1  Plant DNA Extraction (CTAB Method)185

Protocol2     Rapid Isolation of Rice DNA for PCRAnalysis. 186

Protocol3     Digesting DNA for Southern Blotting. 186

Protocol4     Southern Blotting onto Hybond-N+Membrane. 187

Protocol5     Probe Radiolabelling. 188

Protocol6     Hybridization. 189

Protocol7     Microsatellite polymorism analysiswith PCR.. 189

Protocol8     Silver staining. 191

12.3  常见实验用溶液的配制方法... 192

12.4  选种圃试验汇总表... 201

北漂农民工圆博士梦... 204

夜宿车马店... 208

 

 

4.6棉花线粒体RNA提取

 

应该列入 5.11

 

 



https://wap.sciencenet.cn/blog-824395-805326.html

上一篇：植物遗传育种学系第三期学术沙龙
下一篇：谎言重复1000次就变成真理了吗？
收藏 IP: 1.202.186.*| 热度|

0

该博文允许注册用户评论 请点击登录 评论 (0 个评论)

数据加载中...
扫一扫，分享此博文

全部作者的其他最新博文

全部精选博文导读

相关博文

Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )

GMT+8, 2024-5-8 21:21

Powered by ScienceNet.cn

Copyright © 2007- 中国科学报社

返回顶部