捕食线虫真菌的遗传操作方法与手册
文章链接： https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/21501203.2023.2165186
文章引言 捕食线虫真菌（Nematode-trapping fungi, NTF）是典型的肉食真菌，具备腐生和捕食两种生活方式，可以通过营养菌丝特化形成的捕食器官捕捉线虫。作为真菌的一个特殊类群，NTF不仅是研究真菌生活方式转变的优良模式生物，也是探索线虫生物防治的重要自然资源。目前，NTF的捕食机制尚不明晰。前期NTF相关组学研究挖掘了大量与捕食性状表型相关的基因和通路，亟需方便高效的分子工具进行验证。中国科学院微生物研究所兼职研究员、南开大学教授刘杏忠老师团队在Mycology近期发表的一篇文章综述了NTF中遗传操作手段的建立和进展，总结和讨论了转化方法、随机基因突变方法和靶向基因敲除方法的原理和使用案例，并提供了相应的基本操作流程，为NTF及其他真菌类群的研究人员提供了明确的参考和指导。
研究发现 基因操作表达盒相关元件
文章总结了应用于NTF的启动子、筛选标记和荧光蛋白。 表1 应用于NTF的启动子
表2应用于NTF的筛选标记
转化方法 文章介绍了成功应用于NTF的PEG介导的原生质体转化法和根癌农杆菌转化法的原理和使用案例，并提供了相应的基本操作流程。
图1 PEG介导的原生质体转化的基本流程
图2 根癌农杆菌转化法的基本流程
随机基因突变方法
文章总结了成功应用于NTF的限制性内切酶介导整合的随机基因突变方法的原理和使用案例，并提供了相应的基本操作流程。
靶向基因敲除方法
文章介绍了成功应用于NTF的靶向基因敲除方法，包括同源重组法和CRISPR（clustered regularly interspaced short palindromic repeats）技术的原理和使用案例，并提供了相应的基本操作流程。
结语 文章结尾展望了NTF领域中未来需要建立的分子工具，如诱导型启动子、营养缺陷型标记、转座子介导的基因敲除方法、质粒形式的CRISPR系统和基因干扰方法等。
Please cite this article as 引用信息 Shunxian Wang & Xingzhong Liu (2023) Tools and basic procedures of gene manipulation in nematode-trapping fungi, Mycology, DOI: 10.1080/21501203.2023.2165186
Tips The research described here is jointly supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 31770065, No. 32200009), the National Key Research and Development Program (2018YFD0201202).
作者简介｜PROFILE 刘杏忠 研究员/教授 中国科学院微生物研究所兼职研究员，南开大学教授，国家杰出青年科学基金资助学者。现任国际菌物学会执委，中国植物病理学会副理事长。曾任中国菌物学会理事长、亚洲菌物学会主席、真菌学国家重点实验室主任、中国科协第八届委员会委员。中国菌物学会“戴芳澜杰出贡献奖”获得者，长期从事真菌进化生物学及微生物组稳态研究。获得包括国家科技进步二等奖等科技奖十余项。发表论文300余篇。
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