前言: 小水獭最近实验遇到很不开心的问题,就是荧光蛋白漂白的很快,拍不到理想的照片.于是小水獭下定决心,好好弄明白这个问题.
GFP系列(一) GFP好像还是FP家族最好的一个
绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)最初是来自于一种水母Aequorea victoria的发光蛋白.2008年诺贝尔奖颁发给三位科学家下村脩(Osamu Shimomura)、Martin Chalfie 和钱永健 (Roger Tsien).就是由于他们三位在GFP上里程碑式的贡献.尽管在Roger Tsien的实验室研制了许许多多GFP的突变衍生物(参照图1),可以发出不同颜色的荧光.但是小水獭的感觉,在实际应用上,好像还是自然进化来源的GFP各方面指标最好.
http://www.rsc.org/ej/CS/2009/b904023d/b904023d-f9.gif
在实际应用上,有各方面的指标:比如光学稳定性,不容易漂白(bleaching,quenching);荧光强度;不形成集聚(aggregation);pH稳定性;不产生细胞毒性(因为FP的荧光集团形成会产生H2O2).从文献上看,很多种GFP衍生物都很理想,可是使用起来,小水獭表示很抓狂.mCherry已经是Roger Tsien实验室发表文章中大力推荐的一个,可是小水獭用起来,~~~~(>_<)~~~~ 说多了都是泪.主要缺点就是荧光发光集团不稳定.一拍照就漂白的差不多了.
另一些来自于珊瑚虫DsRed及其衍生荧光蛋白可产生集聚aggregation(见图2).对于tdTomato链接的蛋白的表达不利.但是使用GFP就不会有这两方面缺点,虽然荧光强度比tdTomato弱比较多.
http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/spectralimaging/images/spectralfretfigure4.jpg
参考文献:
Shaner NC, Steinbach PA, Tsien RY (2005) A guide to choosing fluorescent proteins. Nature methods 2:905-909.
http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/probes/index.html
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