小白:拿到产品后都不知所措了,之前拿到的产品一不小心就选错了溶剂,直接废掉不能用了,扔掉的都是白花花的经费啊。
师兄:拿到产品不能想当然的就动手,要多查资料查文献。科学研究一切都是要有理有据有出处的,即使没有相关文献也是需要查阅大量相似资料奠定理论基础,设置梯度来摸索的。一切都是不容易的。
萌 Cece:给药是个大工程,需要大量的理论基础和文献参考,只有站在巨人的肩上,我们才能看的更远,走的更久
不同的产品,不同的给药方式和给药剂量,即使是同一产品,不同的细胞,不同动物模型,给药剂量也是不一样的。拿到产品后,我们要根据产品名字和自己的实验设计,有目的的去查文献。
■ 细胞实验,剂量如何查询
■ 当小分子抑制剂遇到转染
当然,并不是所有的剂量组都只有小分子化合物,有些伙伴可能会纠结 “我还要给细胞转染,这个时候我要怎么加药呢?” “除了小分子抑制剂,我要加我自己合成的其他药物,该是怎样怎么加药呢?”
如下面这篇文章里,作者团队探究 κ 阿片受体 (KOR) 在 食管鳞状细胞癌 (ESCC) 中的作用及其潜在机制,研究者前期使用 siRNA 敲低 KOR 表达,发现 KOR 下调增强了 ESCC 细胞的增殖、转移和侵袭能力。激活 PI3K -Akt 通路对肿瘤细胞(经 siRNA 敲低 KOR 表达处理)的增殖有促进作用,为探究 AKT 的激活是否是导致转染 siRNA-KOR 的肿瘤细胞的增殖、入侵和迁移的原因,使用小分子抑制剂 HY-10249A (0.5 μM) 对其进行处理[1]。
图 3. AKT 激酶抑制可以逆转 KOR 的抑制对细胞增殖、侵袭和迁移的影响[1]
关注关注文献中的 Method 部分,搜索关键字以及做好整理。
搜关键字以及做好整理。常见关键字 Pretreatment,co-treatment, following, before treatment 等等。
动物实验的给药方式包括口服,灌胃,注射 (皮下注射,皮内注射,静脉注射,腹腔注射,肌肉注射等),具体可参考小 M 的往期推文:给药方式犹豫不决?不看你就亏了。
在动物实验给药之前,首先明确自己的实验动物和实验模型,再用关键字查阅文献选择合适的给药方式进行实验设计。如下所示:
在查阅文献的网站搜索框中输入产品名称,动物模型,剂量单位(小分子类产品一般 mg/kg 较多),搜索文献,搜到文献后参考文献剂量设置梯度进行就可以啦!
还是以 LY294002 为案例,假设你用的小鼠是 BALB/c 小鼠,准备做乳腺癌相关研究,那么你可以关键字可以这样设置!“LY294002 breast tumor BALB/c mg/kg” 或者 “LY294002 breast cancer BALB/c mg/kg”。
好了,查到大量文献后,请进入阅读学习模式!
还有这样一种情况,可能你查到的文献都是小鼠,但实际你要做的是大鼠,但是找不到文献支持,下面策略可以考虑: 使用常见物种给药剂量的相互换算,如下表 1 所示,根据公式 Animal rat (mg/kg) = Animal mouse (mg/kg) multiplied by (Animal mouse Km/Animal rat Km)。即大鼠体内的给药剂量为小鼠给药剂量的一半 (请注意,严谨起见,设置浓度梯度剂量组)[2]。
■ 溶解界老大哥:万能溶剂 DMSO
很多产品并不溶于水,这时候,我们的万能溶剂 DMSO 就闪亮登场了。
细胞实验可以根据您的最大使用浓度,配置 1000X 的储液,使用时培养基稀释到工作液浓度。
Tips: 有时候可能会遇到产品本身溶解度不高的情况,无法配置 1000X 的储备液;要做好溶剂对照,排除下 DMSO 对实验结果的影响。
但溶剂的选择,也不能想当然是 DMSO,前切记切记多看说明书。
注:MCE 说明书的溶解方案都是实测数据。有些产品很有可能是万能溶剂也溶解不了,番茄红素为例,它的溶剂是 THF 四氢呋喃。此外,其他有机溶剂 DMF (铂类物质的好朋友),丙酮等,虽相对 DMSO 使用较少,但它们还是药物溶解的好溶剂!见往期推文:溶剂大比拼—细胞实验篇。
您如果选择 PBS 或生理盐水配置,溶解度参考水中的溶解信息,配置好后 0.22 µm滤膜过滤,直接使用不可储存。因 PBS 或生理盐水的成分相对复杂,长期储存不确定是否会影响产品活性,所以不建议用 PBS 或生理盐水陪住储液。
■ 免疫缺陷鼠,如裸鼠,NGS 小鼠等体弱小鼠,一般建议配置至少 50X 的储液。
可能有小伙伴要问:50X,这是什么意思?此处以Rapamycin (HY-10219) 为例,一般小鼠体内的给药剂量在 1-10 mg/kg。假设给药 8 mg/kg [3],小鼠体重为 20 g,腹腔注射,200 µL 的给药体积。
动物实验中,有些模型给药剂量较大,可能无法配置 10X 或者 50X 储备液,那么需要考虑现配现用的方案,比如 0.5% CMC-Na/saline (HY-Y0703),50% PEG 300 (HY-Y0873) +50% saline 等方案可选 (详见往期推文:动物实验溶剂大 Battle!)。
参考文献
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