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本周第一篇精读文献为浙江工商大学的《 HpaI在毕赤酵母GS115中的表达及肝素酶I产生条件的优化》。
对于蛋白的异源表达,最常见的是将其导入原核细胞中,比如DE3中进行表达优化,而该文章首次选用真核生物 Pichia酵母(GS115)进行表达。主要方法为通过PCR的方法将HepI(HpaI)片段从肝素黄杆菌中获得,并连入质粒pPIC19K中制的重组质粒pPIC9K-HpaI,通过CaCl2的方法转化入DH5α中。用Bpu1102I将质粒pPIC9K-HpaI线性化,通过同源重组整合到GS115的基因组中,使其能够随着基因组的表达而稳定存在并表达,采用化学转化与电穿孔组合的方法将线性化质粒导入GS115中,并在不同浓度的G18抗性的YPD平板上30℃培养,以筛选出最佳的单菌落。再通过Plackett–Burman 设计和Box–Behnken设计挑选出表达肝素酶I的最佳反应条件。