科学求真,亦善,亦美分享 http://blog.sciencenet.cn/u/shawnkmchen Life is a journey, not a destination.

博文

如何配置CHES-NaOH缓冲溶液?

已有 9462 次阅读 2012-10-16 16:16 |个人分类:科研笔记|系统分类:科研笔记

最近在课题研究的过程中,需要寻找一种pH在9.0左右的生物用缓冲体系。一开始在维基百科等网页寻找的时候,一般只有6.0-8.0范围之内的常用缓冲体系。随着搜索的进行,相关的资料也越来越多。第一个合适的缓冲体系来自文献:Angew. Chem. Int. Edit. 2008, 47, (46), 8831-8834。其中提到了两个生物用缓冲体系,一个是pH在9.0的CHES(N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid),第二种是pH在10.0的CAPS (N-cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid)。于是继续在网上寻找CHES的相关信息。比较好的信息来自于Sigma公司的网页,是关于缓冲液配置的Buffer Reference Center。这样基本可以确定在我们的课题中使用CHES缓冲体系。
CHES的结构为:
在25℃时候的pKa值为9.3左右,接近我们需要的9.0。
剩下的问题是如何具体配置成需要的缓冲溶液,我们的目标是50 mL, pH 9.0, 0.1 M的CHES缓冲液母液。开始的时候认为和Tris-HCl缓冲体系差不多,于是根据Henderson-Hasselbalch公式计算了各自的加入量。在准备称量的时候又想到一个问题,CHES在水中的溶解性怎么样?或者CHES在水中的饱和浓度是多少?在网上查到信息为:15 g CHES可以溶在85 mL的水中,为无色溶液。那么,0.1 M的浓度是可行的。就在搜索的过程中,偶然发现一个CHES配置配方(打开网页后单击“相关资料”选项卡),而其中是使用NaOH来调节pH值。再看一下CHES的结构,在水中应该是呈酸性的,后面才用NaOH来调节pH至8.6-10。
于是立马改变配置方法:配置过程如下:(1)称取CHES 1.036 g (MW=207.3 g/mol) ,加入40 mL纯水;(2)测40 mL CHES水溶液的pH值为4.50,测试温度为27℃;(3)加入1 mL 1 M NaOH溶液后,测试pH值为8.83;(3)加纯水定容至50 mL,转移到50 mL样品瓶中,室温下保存。
这样,我们需要的pH在9.0左右的生物用缓冲溶液母液就配置好了,根据经验,在实验的过程中,最后的pH在8.83左右,但会有一点偏差,接近于9.0,符合实验要求。
配置一种缓冲溶液花费了半天的时间,而且在过程中还差一点犯很严重的错误(用酸还是碱调pH值)。为了在实验过程中得到可靠的数据,实验细节很重要,而实验中需要的基础知识还需要认真地对待。



https://wap.sciencenet.cn/blog-339334-623192.html

上一篇:对立的人生
下一篇:选择做博士后的动机

0

该博文允许注册用户评论 请点击登录 评论 (2 个评论)

数据加载中...

Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )

GMT+8, 2021-12-6 20:29

Powered by ScienceNet.cn

Copyright © 2007- 中国科学报社

返回顶部