一、产品简介：
鞣花酸又名六羟基联苯二酸二内酯，是一种高附加值的林产精细化工品，广泛存在于植物界，可通过鞣花单宁降解以及由没食子酸或没食子酸酯合成。鞣花酸具有较强的抗脂质过氧化和清除自由基的能力，对多种细菌和病毒有抑制作用，能抑制由化学致癌物诱发的肝、肺、食道及皮肤等部位的癌变。
本试剂盒将鞣花酸溶于适量稀碱配制分析试液的方法，确定鞣花酸试样在253nm有最大吸收峰，且试液浓度与吸光度之间具有良好的线性关系。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体20mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 液体80mL×1瓶 | 4℃保存 | |
标准品 | 粉剂×1支 | 4℃避光保存 | 临用前加入100μL试剂一，震荡使其充分溶解后，再加入蒸馏水定容至10mL。（即100μg/mL标准品母液） |
三、需自备的仪器和用品：
酶标仪、96孔板（UV板）、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30-50目筛、蒸馏水。
四、操作步骤：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、预实验样本制备
① 组织样本：将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛后，称取0.01g，加入200μL试剂一，80℃水浴提取90min，再加入800μL试剂二混匀，12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。
2、标准溶液的配制：把100μg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成40、20、10、5、2.5、1.25μg/mL的标准溶液备用。
编号 | 稀释前浓度（μg/mL） | 稀释液体积（μL） | 标准液体积（μL） | 稀释后浓度 （μg/mL） |
S1 | 100 | 360 | 240 | 40 |
S2 | 40 | 300 | 300 | 20 |
S3 | 20 | 300 | 300 | 10 |
S4 | 10 | 300 | 300 | 5 |
S5 | 5 | 300 | 300 | 2.5 |
S6 | 2.5 | 300 | 300 | 1.25 |
3、预实验上机操作：
① 酶标仪预热30min以上，调节波长至253nm。
② 操作表：
试剂名称（µL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
上清液 | 200 | - | - |
标准溶液 | - | 200 | - |
蒸馏水 | - | - | 200 |
于253nm处读取吸光值A，分别记为A测定、A标准、A空白。计算ΔA测定=A测定-A空白，∆A标准=A标准-A空白。 （注：空白管只需测定1-2次） | |||
4、正式实验：
① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；
② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；
③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。
五、结果计算：
1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μg/mL）。
2、鞣花酸含量(mg/g 质量)=x×V÷103÷W×D
V：加入提取液体积，1mL； 103：μg与mg的转换关系；
W：样品质量，g。 D：稀释倍数，未稀释即为1。
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