1、qPCR检测端粒时，样本可不可以两重复？

答：个体样本检测，建议3重复；流行病学研究样本可2重复，已有相关文献报道，但不建议单复孔。

2、qPCR检测端粒时，是否一定要做标曲？

答：如果需要检测端粒绝对长度或者结果精准，需要做标曲；如果只需要检测端粒相对长度可以不做标曲，通过△△Ct计算结果。

3、不同抽提试剂盒提取的DNA是否都可以用于端粒长度实验？

答：可以。不同抽提试剂盒抽提的DNA经DNA纯化液处理后可用于后续实验，结果可相互比对。

4、用QIAGEN抽提试剂盒抽提的DNA，A260/A280在1.7-1.9范围内，是否还需质量标化？

答：需要。不同批次抽提，DNA质量存在波动，需要将样本、标准品同时一起纯化再标化。

5、为什么电泳上样量为2µg，条带却很淡？

答：可能是胶的浓度偏高，建议用0.7-0.8%琼脂糖凝胶；也有可能是在电泳过程中，核酸弥散，建议用1.5×-2×的loading buffer；也有可能胶浓度不均一；电泳液太脏，电泳过程中存在降解。

6、端粒长度检测时，血液样品怎么保存？

答：建议存放在﹣20℃或﹣80℃。

7、样本、标准品和校正品是否需要都割胶回收？如果是，电泳上样量为多少？

答：DNA质量都很差的前提下，确保样本的均一化，样本、标准品和校正品都需要割胶回收。样本电泳上样量建议1 µg以上，保证回收效率。

转载本文请联系原作者获取授权，同时请注明本文来自邓倩云科学网博客。

链接地址：https://wap.sciencenet.cn/blog-3140696-1425896.html?mobile=1

收藏

分享