UreG是一个需要在脲酶含镍的活跃位点组装的GTP酶。在此，为了研究重组大肠杆菌细胞中脲酶激活体在活的有机体内的免疫效果，纯化蛋白质的性能特征，活体分析和体外蛋白质的相互作用，一个标有链球菌的克雷白氏杆菌UreG（UreG_Str）和UreG_Str选定的定点变种被构建。

       鉴于带有标签的链球菌，并没有增强UreG激活脲酶的能力，基本上废除了K20A，D49A，C72A，H74A，D80A，以及S111A UreG_Str变种中酶的活性，还减少了E25A，C28A和S115A蛋白质的活性。 Lys20和Asp49可能在GTP的结合/水解和镁的结合中分别发挥作用。 UreG_Str的每个单体（每个金属离子的Kd为5μM）在一个结合位点结合一个镍或锌离子，包括Cys72在内，这种现象和使用C72A UreG_Str使镍离子的Kd增加 12倍及在突变蛋白质不存在的情况下硫对镍电荷转移带的出现一样神奇。

       基于UreG和HypB的同源性，一个GTP酶需要氢酶组装，同时随着变体的出现，His74很可能是一个额外的金属配体。在体内的毁坏实验显示出Asp80对稳定UreG_Str和UreABC – UreDF复合物的相互作用起着重要的作用。在体外下的毁坏实验表明UreG能够和UreE相结合，并且在镍或锌离子的存在下相互作用增强。金属伴侣 UreE暗示在UreABC – UreDFG复合物中要把束缚的镍转移到UreG中，同时金属离子随之转移到UreD中，然后在GTP依赖的过程中转移到脲酶新生的活性位点中。

转载本文请联系原作者获取授权，同时请注明本文来自梁红玉科学网博客。

链接地址：https://wap.sciencenet.cn/blog-311367-338969.html?mobile=1

收藏

分享