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抗淋巴细胞药Cyclosporin A的生物性质研究

已有 2252 次阅读 2015-5-26 09:57 |系统分类:博客资讯| 抑制剂, Selleck, Cyclosporin, 抗淋巴

Cyclosporin A 是一种抗淋巴细胞药,竞争性结合且抑制calcineurin

   体外研究:在T细胞中,Cyclosporin A与亲环蛋白(免疫亲和素)结合,形成亲环蛋白-Cyclosporin A复合体,其结合并抑制钙调磷酸酶。Cyclosporin A 抑制钙调磷酸酶,IC50 7 nM,随后阻断NF-AT核转运。 Cyclosporin A通过抑制MTP(线粒体通透性转换孔)的开放而影响线粒体,IC50 39 nM

   体内研究:Cyclosporin A是一种免疫抑制剂,小鼠,大鼠,和荷兰猪经非肠道给药或者口服给药都有效,临床上用于器官移植中预防免疫排斥。

分子式:


细胞试验:

细胞系:Jurkat细胞(无性繁殖J77)

浓度:~100 nM

处理时间:1小时

   方法:免疫抑制剂以细胞治疗浓度的1000倍溶于乙醇。细胞(106)悬浮于微量离心管1ml完全培养基中;1 μl乙醇或者Cyclosporin A乙醇溶液加入反应液中,细胞在37°C下培育1小时。细胞在冰浴下用1ml PBS洗两次,在50μl低渗缓冲液中裂解,缓冲液每毫升包含50 mM Tris (pH 7.5); 0.1 mM EGTA; 1 mM EDTA; 0.5 mM二硫苏糖醇; 以及50 微克苯甲基磺酰氯,50 微克胰蛋白酶抑制剂,5微克亮抑酶肽,和5 微克抑肽酶。裂解液用液氮冷冻,再在30°C下融化,循环3次,随后在 4°C下以12,000×g离心10分钟。




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