在毕赤酵母中构建可消除游离sgRNA质粒的高效CRISPR/Cas9基因组编辑系统

High efficiency CRISPR/Cas9 genome editing system with an eliminable episomal sgRNA plasmid in Pichia pastoris

来源：Enzyme and Microbial Technology

IF:3.448

摘要：巴斯德毕赤酵母是一种甲醇营养酵母，由于其强大的可诱导酒精氧化酶启动子(PAOX1)，宿主异源表达蛋白质。然而，在巴斯德毕赤酵母中操作基因组是困难的。在前人尝试将CRISPR/Cas9系统应用于巴斯德毕赤酵母的基础上，本研究成功地构建了一个含有异构体sgRNA质粒的CRISPR/Cas9系统，获得了100%的基因组编辑效率、较高的多拷贝基因编辑效率和稳定的多基因编辑能力，且不会因多sgRNA的存在而急剧下降。约82%的sgRNA是有效的。CGG的切割效率可能比其他三个NGG基序略高且更稳定，GC含量越低，切割效率越高。这为研究人员提供了一个稳定的基因组编辑工具，编辑效率高，缩短了实验周期。此外，我们还将dCas9导入巴斯德毕赤酵母中，实现了目的基因干扰，扩展了巴斯德毕赤酵母中的CRISPR/Cas9工具箱。