非常感谢何老师的分享。

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TE煮沸法快速获得可扩增DNA

何华纲

近日盟主推送了“史上最快核酸提取方法，30秒内完成”，这里跟大家分享一下我们实验室使用的民间版DNA提取方法，发表论文时（Genetic,Physical and Comparative Mapping of the Powdery Mildew Resistance Gene Pm21 Originating from Dasypyrum villosum. Front. Plant Sci. 2017, doi:10.3389/fpls.2017.01914.）也没有好好考虑命名，为了交流方便，不妨叫作“TE煮沸法”，具体如下：

1、剪取1厘米左右叶片放入1.5ml离心管，玻璃棒手工研磨数下可至匀浆。

2、加入150微升TE（成分及浓度见原文），90度煮10分钟，释放DNA，同时灭活各类核酸酶。

3、10000rpm离心1分钟，可避免颗粒物对PCR的干扰，提高PCR稳定性；离心后无需倒管，直接取上清液作为PCR模板。

4、PCR扩增时，根据提取液中EDTA的用量及模板用量，按比例增加Mg离子，消除EDTA对Taq酶活性的影响。

全过程花费时间：平均每个样品的处理时间差不多就是剪叶片编号所花时间。

在对簇毛麦Pm21进行遗传作图时，面临了着这样一个问题：Pm21所在染色体区域存在严重的交换抑制（大约1/20染色体片段的总遗传距离仅0.3cM）。想用一个超大的群体来解决，但小作坊里人手紧缺。问过公司，报价不低，于是狠下心来自己摸索DNA提取方法。刚开始，想用一个相对简单的方法来提取质量较好的DNA，但是方法再简单，有些步骤总不能少的，要过上万单株的群体，恐怕还是要得抑郁症。痛定思痛，改变观念，放低要求，不讲质量，只要释放出“可扩增DNA”就行，这样就有了“TE煮沸法”，完成了Pm21的精细定位。文中Figure2的多重PCR就是用这个方法做出来的。

“TE煮沸法”，除了高浓度的TE，不使用其他试剂，避免了试剂因素对后续PCR的干扰，至于提取液中过多的EDTA，在PCR体系里按比例多加Mg2+就可以了。整个提取过程是一管式的，无需倒管，减少了人工出错环节。获得的DNA粗提液相当稳定，在4度放置几个月后PCR照扩不误。“TE煮沸法”也同样适合于小麦、大麦、玉米、水稻等单子叶植物和拟南芥、油菜、番茄等双子叶植物。

“TE煮沸法”操作简单、快速，但主要还是基于人工磨样，后续或可结合磨样机实现自动化操作。此外，由于DNA完整性可能比较差（直接电泳是看不出条带的），做做分子标记没什么问题，但要用来克隆基因，还需慎重。

有需要的实验室可以试一试，同时也欢迎大家分享自己的学习和实验等的心得体会。想法不怕不成熟，就怕没想法。

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