1.阻滞有丝分裂处理。将样品加入含0.01%的秋水仙素的海水中处理样品2小时，来降低细胞质的粘度，促进染色体缩短分散，障碍纺锤体形成，让许多处于分裂的细胞停滞于细胞分裂中期。卤虫建议0.02%（30mg/100ml稀释2/3倍）放于20度3小时(核型分析或倍性都可以)或者4小时(染色体倍性)。

2.低渗处理。 加0.075M氯化钾溶液,室温下低渗30分钟；(20-50分钟都可以，期间最好更换1-2次低渗液，也可以用双重蒸馏水低渗，但比氯化钾低渗效果差些，作用①使细胞吸水膨胀，让染色体随之分散到细胞质内，有利于染色体分散。②新鲜双蒸馏水进入细胞，使细胞体积增大，细胞质浓度降低，有利于染色体标本清洁程度提高。) 卤虫建议双蒸水30分钟,过长卤虫会死亡。

3.固定处理。预固定，向低渗液中沿壁加入部分新配置的固定液体，1-5分钟吸掉； 加入新配置的固定液（甲醇∶冰醋酸=3∶1），或者2：1,固定液放久了会生成酯类，影响固定效果，固定20分钟；重复一次。其主要作用是①迅速杀死细胞，保留分裂图象。②使染色体核蛋白变性、沉淀，呈现出染色体真实形态及结构。③使细胞质原生质体蛋白变性、沉淀，有利于染色体背景清晰。如果固定液不新鲜或甲醇!冰醋酸的质量不佳时,染色体形象模糊染色体周围有胞浆背景.所以固定液应现用现配。甲醇低温预冷藏，卤虫建议至少20-40分钟。(对于组织块，固定好了之后可以用40%醋酸1分钟？，60%醋酸3分钟？分步解离染色体不发毛，解离后吹散，然后制片或流式细胞)

4.制片。滴一滴固定液，用镊子柄垂直敲打迅速将材料敲碎涂抹，或滴45%醋酸1-2滴后，再次敲打，借助醋酸液表面张力把分裂细胞分开、把染色体引开，并除掉大块组织残渣。涂抹或敲碎涂抹制片的玻片均应45度角斜放自然干躁或火焰干躁。火焰干燥是指载有分裂细胞材料的载玻片在酒精灯火焰上微微加热烤干的办法，火焰干燥对分裂细胞有分色的作用。为了加强细胞分色，还可以在材料处滴加1滴甲醇冰乙酸固定液后，再火焰干躁，其细胞分色效果更好。火焰干躁时，玻片离火焰75px左右，来回晃动，千万不要离火焰太近，防止炸片导致细胞破碎。

5．染色。10%Giemsa染色15分钟，蒸馏水洗，自然干燥。Giemsa染液PH值偏碱, 染色体着色发蓝,不鲜艳,pH 稍偏酸,呈现玫红色,色调鲜艳, 形态结构清晰.(卤虫建议1分钟-3分钟,根据染液质量)。