双光子共聚焦激光显微镜

双光子显微镜（Two-photon microscopy）又称作非线性（ NonLinear  Optics）、多光子、双光子激光扫描显微镜，是建立在先进的超快脉冲激光扫描技术基础上的显微镜实验方法，在更深入的层面上提供了更优秀的光学切片能力。

70 年前 Maria Göppert-Mayer 第一次阐述了多光子激发的基本原理，但是该假设直到30 年后脉冲红宝石激光发明后才被证明。在高光子密度条件下，两个光子可以同时（ 10^-18 秒以内）被吸收，使荧光团中的电子跃迁到高能级激发态，再发射出一个波长较短的光子；其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。

双光子荧光激发方法使用穿透性强的长波红光或近红外光采集标本高分辨率荧光图像，对活性标本的杀伤极小，因此非常适用于活细胞成像，尤其是厚的活组织如脑片、胚胎、整个器官甚至整个机体的成像研究。

双光子的优势

l  更深的穿透深度

l  更少的光漂白和光毒性

l  可调的激发波长—多色激发

l  非线性效应的成像—SHG

l  更佳的信噪比

l  激发波长和发射波长之间更易分开

l  可由红外（IR）激发UV和VIS