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2009209
研究项目创新点:
1 国内首次成功开发出用于新生儿苯丙酮尿症筛查的酶法定量检测试剂盒,克服细菌抑制法半定量、不易自动化和易受抗生素干扰的缺点,同时还克服了荧光法试剂易受干扰和另需添置设备的缺点。
2 将球形芽孢杆菌的pdh基因克隆到大肠杆菌pET系统并进行表达,通过活性蓝4纯化获得高比活性和高得率的L-苯丙氨酸脱氢酶(PheDH),基于该酶开发的新生儿苯丙酮尿症筛查试剂的技术指标达到国外先进水平,其与美国Bio-Rad公司试剂方法学比较r>0.9。
3 筛选出的底物显色系统,生成的产物可以在波长450nm下进行读数,适用于所有的酶标仪,而无须更换滤光片,改变了国外进口试剂必须使用570nm的滤光片的局限。此项技术处于国际领先水平。
4 利用冷冻真空干燥技术,将L-苯丙氨酸脱氢酶(PheDH)和辅酶(NAD+)由液态转变为固态,从而大大提高了试剂盒的有效期及稳定性。
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