各种类型的荧光显微镜在当前生命科学领域有着广泛的应用,特别是1994年Martin Charfie等在秀丽线虫中表达绿色荧光蛋白,使得科学家可以用各种颜色荧光蛋白来标记蛋白质分子,从而实现活细胞成像,极大推动了生命科学的发展。由于荧光蛋白产生的光信号比较弱,所以要求信号采集的数码成像系统要有高敏感性。普通荧光显微镜一般采用自己生产或贴牌的数码相机,比如蔡司的AxioCam MRm (用于IMAGER M1),Axiocam 506 mono/color(用于IMAGER M2),徕卡的DFC350 FX (DM5000B)。
但是还有一些公司是专门生产研究级数码成像系统的,常见的有英国的安道尔(ANDOR)和日本的滨松(HAMAMATSU)。其他还有Photometrics、Princeton Instruments(PI,普林斯顿仪器)等。Photometrics和Princeton都隶属于Roper Scientific(http://www.roperscientific.com)。
Roper Technologies(儒博科技集团)是一家多元化的科技公司,总部设在佛罗里达州Sarasota,Roper科技公司(NYSE: ROP)是标普500指数、 Fortune 1000 和罗索1000指数的成份股。Roper Scientific相当于集团旗下的医学和科学成像事业部,是世界范围内首屈一指的研究级数码成像系统研发机构,目前旗下拥有三家子公司:Photometrics、Princeton Instruments、QImaging Digital Imaging。
Photometrics是美国一家生产科研级CCD数码相机的专业公司,成立于1978年,从1998年起成为Roper Scientific的子公司。Photometrics公司是世界上技术领先的科研级CCD数码相机的生产厂商,其卓越的技术表现在:其产品集成了当今CCD成像领域最先进的技术;非凡的产品的低噪声设计;产品广泛应用于生命科学等领域。我们实验室的宽场反卷积显微镜是API公司的DeltaVision,其采用的相机就是Photometrics公司旗下品牌CoolSNAP HQ2 CCD相机。
21世纪初,突破光学分辨率极限的超分辨技术出现了。目前被广泛地应用于生物科学研究的超高分辨率荧光成像技术主要分为三大类, STED技术, PALM/STORM技术,和SIM技术。PALM/STORM的分辨率最高,可以达到25nm,STED的分辨率次之,达到60nm,而线性SIM是光学分辨极限的一倍,达到100nm,非线性SIM的分辨率更高,但是目前还没有商品化。尽管线性SIM 超分辨显微镜的分辨率不及STED 和PALM/STORM,但是,后二者需要很强的激发光来照明样品,对样品和荧光染料有特殊的需求,所以当前在生命科学领域最常用超高分辨荧光显微镜的还是基于线性SIM技术。
目前中国市场上应用比较广泛SIM显微镜有两个品牌:GE和NIKON,目前,GE的SIM型号是DeltaVision OMX SR,报价大概在60万美金左右,价格不菲。
目前,市场上还出现了一些类似SIM的技术,据称也可以达到100纳米的分辨率。其中就有冷泉科技正在销售的Live-SR(Live Super-Resolution Confocal Microscopy),即在盘式共聚焦显微镜基础上加装超分辨模块。他们的模块就来自Roper Scientific,包括硬件和软件两部分。Live-SR基于光学解调的结构光照明技术,结合盘式共聚焦技术,可在低光毒性条件下,快速获得超分辨图像,是实现活细胞超分辨成像的理想解决方案。
其特点是:
最佳分辨率可达105nm(X Y轴)
最快采图速度可达1000帧/秒
可实时活细胞成像。
对荧光蛋白无特殊要求。
活细胞成像时光毒性小。
最多兼容6个荧光通道。
最多可实现4个通道同时成像。
可在当前主流的研究级显微镜基础上搭建。
兼容当前主流的三种相机:CCD, EMCCD, SCMOS。
无需专门培训,上手快。
无结构性人为失真(No structured artifact)。
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