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獭獭 in WSU lab (4)

已有 3397 次阅读 2009-5-22 03:58 |个人分类:活色生香de生物科学|系统分类:科研笔记

今天和Elena讨论了一下免疫染色的一些问题,收获良多。

首先是用多聚甲醛(PA)固定时间长短的问题。PA固定时间长,组织保存得好,但是不利于抗体识别。因为PA的作用就是使蛋白发生交联,交联的越多当然结构越好。如果不染色,单使用DIC或者看自发GFP表达,我想PA固定时间长一点比较好。但是如果发生交联太多,蛋白质抗体表位就有可能被改变或者掩盖,不利于抗体识别。所以PA固定时间的长短,是在染色效果和结构稳定之间做个取舍。

然后就是抗体反应前的封闭剂的作用。以前一直使用的是血清或者BSA蛋白。在这里用的是化学合成封闭剂chemical blocker。chemical blocker和TritonX100以及sodium azide用PB溶解,称谓CTA。 blocker当然是封闭非特异性表位的,TritonX100我今天才知道,它是拿来做去垢剂,溶解质膜,在细胞膜上打洞,使抗体易于进入细胞内的。想想以前如果加上Triton不知道染色效果会不会不一样?!不过当然以前是细胞膜表面的肾上腺素受体,但是加了triton,也许细胞内的受体也会被标记上。



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