科研资讯 - Frontiers in Bioengineering and Biotechnology

奥地利工业生物技术中心 Doris Ribitsch 团队利用奶牛的瘤胃液对三种合成聚酯：聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）、聚己二酸/对苯二甲酸丁二酯（PBAT）和聚呋喃甲酸乙二醇酯（PEF）进行了水解研究，发现在细菌、真核生物和古生菌的共同作用下，胃液可以很好的水解合成聚酯，其中瘤胃液对PEF情有独钟，水解72小时后其水解产物浓度为4.8 mM，PET和PBAT则释放出了0.6和0.75 mM的水解产物。

Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2020 IF: 5.890

在遍布世界的塑料垃圾中聚酯占据重要地位。根据欧洲塑料回收组织协会（EPRO）的统计，2019年欧洲排放的2580万吨塑料垃圾中聚酯约占15%。

在众多塑料垃圾处理方法中，酶水解越来越受到人们的关注，成为解决塑料污染问题的良方。为了找到能分解聚酯的酶，科学家在自然界中进行了广泛搜集，从陆地到海洋，从动物到植物都进行了尝试。

最近，科学家又盯上了奶牛。作为一种食草性反刍动物，牛进化出了四个胃，瘤胃也叫“草肚”，是消化食物的第一站，成年奶牛的瘤胃容积为50~100升，这是迄今已知的降解植物纤维能力最强的天然发酵罐，在这里水解酶先将吃进去的草进行预分解，以便于后面几个胃进行深加工。

因为牛吃进去的草中会含有天然植物聚酯（如角质），说不定从牛的胃液中可以发现能水解聚酯塑料的微生物。

奥地利工业生物技术中心Doris Ribitsch团队利用奶牛的瘤胃液对三种合成聚酯：聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）、聚己二酸/对苯二甲酸丁二酯（PBAT）和聚呋喃甲酸乙二醇酯（PEF）进行了水解研究，发现在细菌、真核生物和古生菌的共同作用下，胃液可以很好的水解合成聚酯，其中瘤胃液对PEF情有独钟，水解72小时后其水解产物浓度为4.8 mM，PET和PBAT则释放出了0.6和0.75 mM的水解产物。

图1. 聚酯降解及瘤胃液微生物群落分析。

研究者从当地屠宰场拿到了瘤胃液后过筛，然后在-20℃冷藏备用。他们选择了三种聚酯：产量最大的PET、可生物降解的PBAT和生物基聚酯PEF。将这三种聚酯粉末和薄膜样品与瘤胃液混合，在40℃和150 rpm的振动器中模拟了瘤胃消化食物的环境，对聚酯进行水解，采用高效液相色谱（HPLC）对水解产物进行分析。

图2. 三种聚酯薄膜样品被瘤胃液水解后的产物分析。

研究者首先进行了瘤胃液中三种聚酯薄膜样品的水解，在72小时后均检测到了水解产物，也就是说瘤胃液可以分解PET、PBAT和PEF，其分解产物浓度分别为0.15、0.5和0.78 mM。

图3. 三种聚酯粉末样品被瘤胃液水解后的产物分析。

在粉末样品水解实验中，研究者发现粉末的水解效率要高于薄膜，同样水解72小时后，PET和PBAT分别释放出0.6和0.75 mM的水解产物，PEF释放的更多，达到了4.8 mM。他们认为影响瘤胃液水解效率的因素很多，聚合物链越柔顺，越有利于酶的吸附和水解。

图4. 在瘤胃液中水解 24、48和72小时后，PET、PBAT和PEF薄膜样品的SEM图像。

研究者对瘤胃液水解后的聚酯薄膜样品进行了SEM分析。由于水解酶的尺寸太大，无法扩散到聚酯薄膜内部，所以水解是从表面开始的。很明显瘤胃液更喜欢“吃”PBAT和PEF，水解24小时后，PBAT和PEF表面就已经变得很粗糙：PBAT薄膜表面可以看到凹槽，而在PEF薄膜上则形成了凹坑，而此时PET表面还比较光滑。

图4. 利用宏基因组分析瘤胃液中的微生物群落。

为了弄清楚瘤胃液中到底是哪种微生物群落最能水解聚酯，研究者从胃液中提取DNA，然后进行宏基因组分析，总共得到了360万个读长和14.8 Gb的DNA数据，采用鸟枪宏基因组学技术对瘤胃液中的微生物群落进行分类，发现在这个“大家庭”中98%的是细菌，1%的是真核生物，0.9%的是古生菌，最后不到0.1%的是病毒。

在瘤胃液98%的细菌中，假单胞菌数量最多，不动杆菌排第二，研究者认为虽然假单胞菌对聚酯水解的功劳最大，但不动杆菌的作用也不能埋没。关于真核生物，已有关于曲霉、青霉和假丝酵母菌水解聚酯的报道。所以，他们认为是瘤胃液中的细菌、真核生物、甚至是古生菌的联手才实现了合成聚酯的水解，并不是一个群落在战斗。

小结：为了寻找能分解合成聚酯的微生物，研究者利用瘤胃液对PET、PBAT和PEF三种聚酯进行了水解，发现粉末样品的水解效率要好于薄膜，在40℃下水解72小时后，PET和PBAT释放出了0.6和0.75 mM的水解产物，而PEF被水解的效率更高，释放了4.8 mM的产物。利用宏基因组分析，研究者认为瘤胃液中细菌、真核生物和古生菌的共同作用才是水解合成聚酯的关键所在。

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