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分享黑科技Western blotting,SCI论文的思路和写法

已有 4157 次阅读 2020-7-18 09:15 |个人分类:论文润色|系统分类:论文交流| 论文写作、论文思路

一.  基本研究背景

先区分下Southern blotting(针对DNA检测的), Northern blotting (针对RNA检测的), 以及Western blotting (针对蛋白质检测的)。这些不同“方位”的检测在细胞生物学领域都有应用,其中Western blotting (WB) 是使用最为广泛的一种blotting,是检测和鉴定蛋白质的最常用方法。其过程如下:

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Wester blotting 的过程

------Roy, Jyoti, et al. "Small RNA proteome as disease biomarker: An incognito treasure of clinical utility." AGO-Driven Non-Coding RNAs. Academic Press, 2019. 101-136.

二.  最新研究论文

近日,美国的研究人员在《BioTechniques》杂志上发表了题为“Optimization of western blotting for the detection of proteins of different molecular weight”的文章,对WB方法进行了优化,目的是“提高检测灵敏度,同时兼顾高分子量和低分子量蛋白的检测”。

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------Heda, Ghanshyam D., et al. "Optimization of western blotting for the detection of proteins of different molecular weight." BioTechniques 0 (2020).

研究人员关注三个变量,转印膜的类型、封闭液的类型以及Towbin转移缓冲液(TTB)中的甲醇浓度。最终,作者认为,在WB中使用NC膜和封闭混合物,能够获得很强的特异性信号。转印缓冲液中甲醇的存在似乎对高分子量蛋白几乎没影响。对于中小分子量的蛋白,较低浓度的甲醇(10%)足以产生几乎最强的信号。因此,人们可以减少甲醇这种有毒溶剂的用量,而不会影响特异性的信号。

三. 文章思路和写作

WB作为一种几乎所有生化实验室都在使用的一种蛋白质检测手段,其实验过程竟然被研究,还发表了IF2.0左右的文章,有点不可思议吧?实验室还有许多这样的基础生化实验,如ELISA,纸层析,柱层析,DNA(plasmid or genomic; plant or tissue; blood or stool)提取,巨大核酸电泳,双向电泳,银染,ChIP,等等。我们能否根据实验室所长和个人需要,也发表一篇分析生物化学方面的SCI文章呢?我们以这篇为例,讨论如何做这方面的研究吧。

这篇研究WB的论文设计三个变量,包括转印膜的类型(PVDF, NC)、封闭液的类型(BSA,FBS,Gelatin, Bloto, mixture)以及Towbin转移缓冲液(TTB)中的甲醇浓度 (0, 10%, 20%)。根据蛋白分子量分为两种,高分子量和低分子量蛋白。作者首先考量的是转印膜的类型,固定甲醇浓度20%,封闭液的类型(BSA,FBS,Gelatin, Bloto, mixture)都测试高分子量的WB。很明显,在各种封闭液下,NC要优越些。从而确定了转印膜。其次,固定优化的转印膜(NC),比较封闭液(Bloto VS mixture), 甲醇浓度 (0, 10%, 20%)都测试一遍。很明显,在封闭液mixture下, 蛋白条带(高分子量)更好。作者又使用另外一个蛋白(也是高分子量)测试了下,还是发现蛋白条带在封闭液mixture下表现更好。最后,作者使用了第三个蛋白--低分子量蛋白,进行WB测试,发现蛋白条带在封闭液mixture下表现更好,并且甲醇浓度10% VS 20% 没有引起显著差异。自然而然地,作者得出结论,NC更好,封闭液mixture更好,甲醇浓度10%就OK了。

这个分析生物化学实验的研究对象也不是多新颖,实验设计也不见得多巧妙(4个图而已),但是贵在扎实且实用,发个IF2.0左右的文章似乎也恰如其分。基础生化实验那么多,小伙伴们,我们也发一筐?小编就知道不少分析生物化学方面的SCI杂志(IF2-4),有需要的就请留言吧。


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